本产品具有下列特点:

1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

商品属性：

产品英文名称：Human 4-1BBL Protein, His tag (Animal-Free)

产品中文名称：重组人4-1BB配体,His标签无动物源4-1BBL

规格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

货号：EY-01X8896
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于：人源4-1BBL Protein (Arg71-Glu254) (P41273)

活性:Measure by its ability to induce IL-8 secretion in human PBMCs. The ED₅₀ for this effect is 1-5 ng/mL.

蛋白长度：重组人4-1BBL蛋白由184个氨基酸组成，预测分子量为20.4 KD。

纯度:> 95 % ，使用SDS-PAGE检测

通过LAL法测定，每微克蛋白里

背景

4-1BB ligand (4-1BBL) is a type II transmembrane protein that is part of the tumor necrosis factor (TNF) ligand family. As an inducible co-stimulatory molecule, it presents on several antigen presenting cell (APC) types, including B cells, macrophages and DCs. The interactions between 4-1BB and 4-1BBL trigger pleiotropic effects on the immune response including antigen presenting process, proliferation of CD4 and CD8 positive T-cells, as well as cytokine secretion from T-cells through NFκB, c-Jun, and p38 downstream signal pathways activation.Therefore, 4-1BB and 4-1BBL are recently used for the immunotherapy of cancer.

操作步骤：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的产品：

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ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬细胞症蛋白1β

重组人4-1BB配体,His标签无动物源4-1BBLTNFRSF17重组小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 标签) Protein

chloramphenicol/BSA 偶联牛血清白蛋白 2mgchloramphenicol/BSA 偶联牛血清白蛋白

PGA4重组人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein

CTRC Protein Human 重组人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白

SIGIRR Protein Mouse 重组小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 标签)

不适用于人类或临床诊断