实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

鸭胚成纤维分离自胚胎；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。

方法简介：

实验室分离的鸭胚成纤维采用消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的鸭胚成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

鸭胚成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

树突状细胞相关C型凝集素-1   英文名称：   Human Dendritic cell Associated C type Lectin 1   英文缩写：   Dectin 1

二氢二醇脱氢酶   英文名称：   Human Dihydrodiol Dehydrogenas 2   英文缩写：   DDH2

多巴胺   英文名称：   Human Dopamine   英文缩写：   DPN

强啡肽   英文名称：   Human Dynorphin   英文缩写：   DYN

FITC标记人CD11a单克隆抗体

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase 0.5mgDRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) 双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗原

IgG2 Protein Human 重组人 IgG2-Fc 蛋白 (257 Ser/Ala)

MME重组大鼠 CD10 / Neprilysin / MME 蛋白 Protein

CD36 Protein Mouse 重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白 (His & Fc 标签)

PRDX2重组人 Peroxiredoxin 2 / PRDX2 蛋白 Protein

豚鼠胰岛素样生长因子1(IGF1)试剂盒 ，英文名： IGF1 ELISA Kit

Human Mycoplasma pneumoniae aibody (MP-Ab) ELISA Kit 人肺支原体抗体(MP-Ab)试剂盒

rabbitmaixmetalloproteinase9,MMP-9ELISAKit 兔子基质金属蛋白酶9(MMP-9)pcr检测试剂盒分装

CLIAKitforBcl-2(MouseB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKIT小鼠B细胞淋巴瘤因子2

纤维蛋白溶酶(PLASMIN)活性荧光定量试剂盒20次

rabbitCoicosterone,COELISAKit兔子皮质同/肾上腺同(CO)试剂盒规格：96T/48T

鸭胚成纤维细胞大鼠内脂素(VF)试剂盒 ，英文名： VF ELISA Kit

Monkey ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 猴α干扰素(IFN-α)试剂盒

RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit 大鼠Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)pcr检测试剂盒分装

CLIAKitforGlycoproteinVI(Human)ELISAKit人糖蛋白VI

细胞非蛋白/游离巯基含量比色法定量试剂盒20次

RatSomalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISAKit大鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)试剂盒规格：96T/48T