做elisa实验时需要注意哪些问题？

Elisa实验中应该注意的问题,包括样品稀释、试剂盒平衡、样品和试剂的混匀、加样、温育等问题。
1、样品稀释 ：
一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定,以保证试验的灵敏度和特异性。酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应,如果血清不稀释,不可避免会产生很强的非特异性反应,出现假阳性。
2、试剂盒平衡： 
Elisa中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温(约25℃),一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够,样品孵育时间相对缩短,ELISA反应不够充分。冬季室温低,可将试剂盒置37℃温箱20分钟。
3、样品和试剂的混匀： 
在稀释前、后的样品必须充分混匀,所有试剂在加样前也须摇匀,以保证试验的均一性。
4、加样： 
加样是一项很重要的步骤。加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。
5、温育： 
温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
6、洗板： 
固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术,需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来,以保证ELISA测定的特异性。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及时更换吸水纸,尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去,否则可能影响试验结果。
7、显色： 
显色一定要控制时间,根据试剂盒说明操作即可。一般来说,显色时间过短,结果偏低；显色时间过长,空白增高或者非特异性显色增加。
8、比色： 
比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用,而前者比色波长为450nm,后者为492nm,滤光片需根据要求随时更换。因此,容易出现滤光片错用的问题。

ELISA试剂盒代理方面：
本公司elisa试剂盒可以提供免费代测服务，客户自己提供代测样本，七个工作日即可提供客户所需原始数据 。本公司*代理各种种属的elisa试剂盒（酶联免疫法）同时还经营各种*产品：sigma，amresco（大量现货），Abcam，OXOID，Axygen试剂盒，Santa，invitrogen等，货期稳定！

相关试剂盒*：
犬血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒,96T/48T,KB16678
大鼠卵巢癌标志物CA125ELISA试剂盒使用
人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)ELISA试剂盒
小鼠上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠90kDa热休克蛋白αB1(HSP90αB1)ELISA试剂盒使用
人α*(AMY1)ELISA检测试剂盒
人脆性*三联体(FHIT)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA酶免试剂盒
马血管内皮生长因子A(VEGFA)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA检测试剂盒
猪皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA测定试剂盒,96T/48T
兔子白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒
大鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA试剂盒,96T/48T,KB10342
兔子白介素10(IL-10)ELISA酶免试剂盒
人*型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)ELISA试剂盒使用
人*蛋白聚糖5(CSPG5)ELISA试剂盒
微生物尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGP)ELISA试剂盒使用
猴三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA酶免试剂盒
人潜伏转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15055
大鼠雌二醇受体(ER)ELISA检测试剂盒
人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒
兔超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA酶免试剂盒
植物花生四烯酸(AA)ELISA试剂盒使用
人桥粒糖蛋白2(DSC2)ELISA试剂盒
鱼葡萄糖6磷酸脱氢酶(G-6-PD)ELISA测定试剂盒,96T/48T
人*1(VB1)ELISA检测试剂盒
山羊褪黑素(MT)ELISA酶免试剂盒
人羟*糖蛋白(HRGP)ELISA酶免试剂盒,Hydroxyproline human glycoprotein (HRGP) ELISA Kit
大鼠Janus激酶3(JAK3)ELISA酶免试剂盒,Rats Janus kinase 3 (JAK3) ELISA kit
人杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)ELISA测定试剂盒,96T/48T
猪可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒
犬脂多糖/内毒素(LPS)ELISA酶免试剂盒
人分泌性免疫球蛋白A(SIgA)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠白介素7(IL7)ELISA检测试剂盒
豚鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒,96T/48T,KB11665
豚鼠肾素(Renin)ELISA检测试剂盒
猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒使用
牛着丝粒蛋白H(CENPH)ELISA试剂盒,96T/48T,KB16274
人NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA试剂盒,96T/48T,KB14361
人Sc5b-9末端补体复合物ELISA试剂盒使用试剂盒
人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag) ELISA酶免试剂盒
鸡膜联蛋白A5(ANXA5)ELISA试剂盒,96T/48T,KB16033
大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA酶免试剂盒,Insulin-like growth factor binding protein-2 (IGFBP-2) ELISA kit
人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)ELISA试剂盒,96T/48T,KB14418
牛骨桥素(OPN)ELISA测定试剂盒,96T/48T
大鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15766
鸡乙酰*羧化酶α(ACACA)ELISA试剂盒
小鼠一氧化氮合成酶(NOS)ELISA试剂盒,96T/48T,KB12339
大鼠干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISA酶免试剂盒
人肝细胞生长因子激活物(HGFA)ELISA检测试剂盒
马白介素12A(IL12A)ELISA酶免试剂盒,Ma interleukin 12A (IL12A) ELISA kit
牛凋亡相关因子(FAS)ELISA检测试剂盒
人诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒,96T/48T,KB13140
人肿瘤坏死因γ(TNFγ)ELISA酶免试剂盒
*γ1链C区(IGHGI)ELISA试剂盒使用
小鼠*型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒
牛一氧化氮(NO)ELISA试剂盒
鸡前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15927
猪血管生成素1(ANG-1)ELISA试剂盒,96T/48T,KB10618
人基质裂解素(ST3)ELISA试剂盒,96T/48T,KB12459
兔子端粒酶(TE)ELISA测定试剂盒,96T/48T
人生长分化因子9(GDF9)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15025
人组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒
人补体因子H相关蛋白1(CFHR1)ELISA试剂盒使用
兔子软骨寡聚蛋白(COMP)ELISA试剂盒
大鼠CD83分子(CD83)ELISA酶免试剂盒,Rat CD83 molecule (CD83) ELISA kit
马红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒使用
猪内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA酶免试剂盒,Porcine endothelial nitric oxide synthase 3 (eNOS-3) ELISA kit
人磷脂肌醇3激酶(PI3K)ELISA酶免试剂盒
人凝聚素(CLU)ELISA试剂盒使用
人神经调节蛋白2(NRG2)ELISA试剂盒,96T/48T,KB15127
人靶向核糖核酸酶(TR)ELISA测定试剂盒,96T/48T
豚鼠干扰素α(IFNα)ELISA试剂盒使用
小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA检测试剂盒
人脂联素受体2(ADIPOR2)ELISA酶免试剂盒
人抗Smith抗体(Sm)ELISA试剂盒,96T/48T,KB14848
植物P型ATP酶(P-ATPases)ELISA酶免试剂盒
大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2/Flk1)ELISA试剂盒
人IPO38蛋白(IPO38)ELISA酶免试剂盒
人周期素依赖性激酶7(CDK7)ELISA测定试剂盒,96T/48T
猪活性氧(ROS)ELISA试剂盒,96T/48T,KB17838
鸡白介素15(IL15)ELISA试剂盒
人胰岛素自身抗体(IAA)ELISA酶免试剂盒
兔窖蛋白(CAV1)ELISA测定试剂盒,96T/48T
牛表面活性物质关联蛋白C(SPC)ELISA酶免试剂盒,Bovine surfactant associated protein C (SPC) ELISA kit