山羊痘抗体(Pox-Ab)说明书
时间:2011-08-10 阅读:2084
山羊痘抗体( Pox-Ab)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
2pg/ml-60pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中山羊痘抗体( Pox-Ab)含量。实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊痘抗体( Pox-Ab)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入山羊痘抗体( Pox-Ab),再与 HRP标记的抗原结合,形成抗原 -抗体-酶标抗原复合物,经过*洗涤后加底物 TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的山羊痘抗体( Pox-Ab)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( OD值),通过标准曲线计算样品中山羊山羊痘抗体( Pox-Ab)浓度。试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品( 120pg/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔 × 8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。操作步骤
1.
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,
然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.
温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
4. 配液:将
30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5.
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
6.
加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同
3。
8. 洗涤:操作同
5。
9.
显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.
10.
终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.
测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止
60pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
30pg/ml 4号标准品 150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液
15pg/ml 3号标准品 150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液
7.5pg/ml 2号标准品 150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液
3.75pg/ml 1号标准品 150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液
液后 15分钟以内进行。操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项
1.
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.
请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.
底物请避光保存。
7.
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8.
所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.
本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;
2-8℃。
2.有效期:
6个月