全自动菌落计数仪应用之污水微生物检测
时间：2013-03-04 阅读：1075
一般水体和废水以及污水处理中常见的微生物有：细菌Bacteria，真菌 Fungi，藻类 Aglae，原生动物 Protozoa，轮虫 Rotifers, 甲壳纲动物Crustaceans，虫类 Worms （线虫Nematodes与扁虫Flatworms）。
主要的检测项目有细菌总数、酵母菌总数、霉菌总数、大肠杆菌总数等。
1. 细菌总数测定
1.1生化池水样稀释103倍、104倍、105倍、106倍和107倍后，分别取各稀释液1mL接种于培养皿中，倒平板，于37℃生化培养箱中培养24h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
1.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的干重，计算生化池水样中每克干污泥的细菌总数。
2. 酵母菌总数测定
2.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后，分别取各稀释液1mL接种于培养皿中，倒平板，于30℃生化培养箱中培养48h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
2.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的干重，计算生化池水样中每克干污泥的酵母菌总数。
3. 霉菌总数测定
3.1生化池水样稀释102倍、103倍、104倍和105倍后，分别取各稀释液1mL接种于培养皿中，倒平板，于30℃生化培养箱中培养72h后，选取菌落数在30～300个之间的培养物进行计数，每个稀释倍数做5个平行样。
3.2取100mL水样水浴至残留少量水后，于105℃烘箱中烘至恒重，称量水样中活性污泥的干重，计算生化池水样中每克干污泥的霉菌总数。
4. 大肠菌群总数测定
4.1初发酵试验：以无菌操作将各盛有3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液5毫升的5支发酵管内，各接种污水样10毫升，将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约10毫升5支的发酵管内，各接种污水样1毫升，再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约10毫升的5支发酵管内，各接种1∶10稀释的污水样1毫升（相当于原污水样0.1毫升）。将此15支管已接种的发酵管置于37℃恒温箱内，培养24小时。
4.2平板分离：经培养24小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置37℃恒温箱培养18～24小时，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分，进行涂片、革兰氏染色、镜检。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。而且人工计数既消耗时间又耗人力，统计随着人的疲劳度而加大，有的工作人员甚至为了减轻工作量草草了事。
迅数全自动菌落计数仪具有着不同类型平皿的统计功能，能够保存平皿图像和数据库，方面查看验证，迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast菌落智能识别技术。
1. 针对细菌总数测定
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算。自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，zui小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。
2. 针对酵母菌和霉菌
迅数菌落分析仪器内置特殊算法，支持对包含霉菌和酵母菌样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、螺旋接种平板的菌落自动计数和浓度计算。
3. 针对大肠杆菌
迅数仪器的自动菌落计数能力可帮助实验人员快速准确选取“菌落数在30到150的VRBA平板”；利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，迅数菌落仪能迅速识别“紫红色，有沉淀环，且直径不小于0.5毫米”的大肠菌群菌落，只需1秒就计算出大肠菌群典型菌落的菌落数。
4. 一些特殊的污水中还存在着高致病性病原微生物，比如枯草芽胞杆菌黑色变种芽孢。
检测方法：
1）取适量枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液，混入收集罐，使污水中菌液终浓度达到（2～8）×104/mL
2）按照污水处理程序依次进行化学消毒和物理消毒。
3）将滤膜在蒸馏水中煮沸消毒3次，每次15min；滤器用压力蒸汽灭菌（121℃，20min）。
4）检测采样：消毒处理完毕后，用分度吸量管从污水收集罐的采样口吸取100mL待排放的污水,在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。
5）滤膜用50mL PB缓冲液洗涤，除去残留消毒剂。
6）收集洗涤液，在无菌的条件下用微孔滤膜过滤。
7）将微孔滤膜在无菌条件下移放置胰大豆琼脂平皿上进行细菌培养。滤膜应与培养基*紧贴，当中不得留有气泡。
8）采样平皿倒置于温箱中35±0.5℃培养24±2 h后，进行枯草杆菌菌落计数。
对于滤膜、3M纸片等菌落计数，迅数的Colonfast菌落智能识别技术能够识别菌落特征，实现快速自动计数。
杭州迅数科技有限公司是专业从事微生物分析测试技术研究与仪器装备生产的高科技公司。目前主要生产自动菌落计数仪、螺旋接种微生物菌落分析仪、抑菌圈测量仪、β_内酰胺测定仪、抗生素效价分析仪、藻类计数仪、藻类辅助鉴定系统、浮游动物计数仪、生物显微分析系统等产品。产品广泛应用于科学研究、检验检疫、质量监督、环境监测、疾控中心、药品与生物制品检定、食品药品日化生产、以及钢铁石化化工电力等领域。
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