乳胶颗粒凝集试验(LPAT)检测与鉴定热不稳定肠毒素
时间:2011-05-14 阅读:304
由Finkelstein等建立,方法如下。
①乳胶敏化 取lOlL羊抗人源LT-I血清与19Oμl pH8、2*缓冲盐水混匀,再加等体积乳胶制剂,混匀,37℃水浴孵育2h,每15min振摇1次,然后加入用上述缓冲液稀释的O.1%牛血清白蛋白600uL,3Orain而后即可使用。
②待检菌液制备 从MacC或EMB或;HE等琼脂上挑取待检菌落,在装有3Ortl的20000U/ml多黏菌素B的Tris-NaCl缓冲液的指形管内制成菌悬液,37℃水浴温育5~3Omin(视菌液浓度而定),离心沉淀细胞,上清液待检。
③正式试验 在玻片上加10uL待检上清和5,aL致敏乳胶,混匀,轻轻摇动3min,在斜射光下观察结果,判定标准同一般凝集试验。如用抗LT全血清致敏乳胶,检测敏感性为印g/m1的LT;若以亲和层析纯LT抗体敏化乳胶,其灵敏度可达O.O32ug/m1的LT,且无假阳性结果。本法还能检测猪源LT-1。Scotland等用这类商品化试剂盒检测了1OO株大肠杆菌,其结果与Y1细胞法*吻合。
Honda等已报道用LT抗体致敏的葡萄球菌凝集试验宋检测LT,其原理与上法相似。