NiV和亨爪病毒（Hendravirus，HeV）非常类似，此两种病毒在各种免疫学检测中大多数都存在交叉反应，因此，各种实验室检测技术中各种免疫学检测都不能作为尼帕病毒病确诊的依据。

①样品的采集、运输和保存。诊断用的样品采集和运输必须注意生物安全防护。将诊断用样品运送到国外时，必须遵守我国相关的出入境法律法规，以及航空运输协会的危险物品运输规定。动物可能带有病毒的组织样品包括脑、肺、肾、脾、肝、淋巴结。这些脏器都应采样送检。采集的样品应该在冰上或4℃下运输，用干冰。在一20℃下保存不宜太久。

②用细胞培养进行病毒分离。在无菌情况下处理待测样品。用密闭的匀浆器处理含10g／100ml组织样品的悬浮液，如在密闭的金属筒中用可以高压灭菌的金属球进行研磨，或者在罩／袋式匀浆器中用塑料袋进行研磨。样品磨碎后，300g离心，将上清加入到培养的细胞体系中。NiV在很多种类的细胞中都容易生长，这有利于病毒分离。非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）和兔肾细胞（RK-13）对NiV非常敏感。病毒感染细胞后的第3天出现CPE，如果没有出现CPE，应该再盲传2次，每次培养5天。在低感染比情况下，NiV特征性CPE是出现细胞融合现象，经过24～48h，有些融合的细胞可含有60个以上的细胞核。后期，NiV感染Vero细胞形成的融合细胞的细胞核分布在融合细胞的周围。

③病毒的鉴定（RT-PCR方法）。用第七章的RT-PCR方法可以达到快速简便地鉴定分离的病毒是否为NiV。如果发现RT-PCR检测阳性的病料来自以前没有报道过NiV疫情的地区，必须对RT-PCR阳性扩增产物进行测序，并核实序列是NiV序列后才达到病毒的鉴定目的。

④病毒的鉴定（VNT方法）。VNT采用引起50％细胞培养孔发生CPE的TCID50判定法。标准的NiV样品以及待测的NiV样品稀释到每50fuL约含有100个TCID50的病毒。然后把它们加到96孔细胞培养板（平底）中，然后加上等体积EMEM培养基、倍比稀释的NiV标准的抗血清，在37℃作用45min后，每孔加上2．4X104个Vero细胞，zui终每个孔大约200／AL。37℃培养3天后，观察CPE。那些只加有细胞的孔，以及只加有细胞和抗血清的孔都不应出现CPE。相反，那些加有细胞和病毒的孔都应该出现CPE（细胞融合、死亡）。如果分离的病毒可以被标准的阳性血清中和，则分离的病毒可以判定为NiV类似的病毒；如果分离的病毒不能被标准的阳性血清中和，则分离的病毒判定为不是NiV。

疑似病例的判定标准
尼帕病毒病的疑似病例的判定标准是以下3项中任意1项，并且此阳性结果得到国家外来动物疫病诊断中心的确认。
*项：NiV特异性抗原免疫组化检测阳性。
第二项：抗NiV血清抗体的VNT检测阳性，NiV抗血清中和。
第三项：抗NiV血清抗体的ELISA检测阳性或从病料中分离的病毒能够被标准的抗
此外，根据上述第二项，可以判定被检动物感染或曾经感染了NiV类似的病毒。

确诊病例的判定标准
尼帕病毒病的确诊病例的判定标准足以下2项中任意1项并且此阳性结果得到国家外，来动物疫病诊断中心的确认。
*项：临床病料中分离到NiV。
第二项：RT-PCR检测出NiV特异性核酸。
注意：上述第二项必须*排除实验室核酸污染的可能性。