基因组DNA提取常见问题及解决方案
时间:2010-10-16 阅读:1265
基因组DNA提取常见问题及解决方案
1 没有或获得的DNA量很少
A 确保DNA Wash Buffer中是否加入要求量的无水乙醇
B 样品裂解不充分
建议:加大裂解缓冲液的量或减少样品的量;将组织材料充分研磨或匀浆;需要蛋白酶K消化的样品,增加蛋白酶K的用量,或者延长蛋白酶K的消化时间,并将组织尽可能的减碎。
C 吸附不充分
建议:上柱前,请确保裂解混合液中加入适量的无水乙醇。
D DNA洗脱不当
建议:洗脱液较少时,应加在膜的中间;采用ddH2O洗脱时,应保证pH值在7.0-8.5;样品量较少时,若洗脱体积过大,会相应降低DNA的浓度
E 样品中DNA含量少
如果样品中本身DNA含量少,应加大初始材料的量,并相应的增加各种缓冲液的量。
2 柱子堵塞,或者膜上颜色残留
A 样品过多
建议:减少样品的使用量,或者增加裂解缓冲液的量
B 样品裂解不充分,使用了过多的样品,或者样品没有研磨充分
建议:减少样品的使用量,充分研磨样品或者增加裂解液用量
C 裂解后,吸取上清时,带入杂质
建议:离心后,小心吸取上清,避免吸起沉淀,如有沉淀吸起,再次离心后吸取上清。
3 OD260/OD280偏低
A 蛋白质残留
建议:离心后,吸取上清时,应尽量避免吸起沉淀
B 用ddH2O洗脱DNA时,因为pH和离子浓度的影响,OD比值可能会偏低,但是并不代表纯度低。
C OD260/OD280偏高
A 有RNA残留
建议:检查RNase A是否加入,或者RNase A活性下降。
5 不能顺利用于后续酶反应实验
A 乙醇残留
建议:在洗脱前,将吸附柱开盖再次离心,以*去除残留的乙醇。