一 原理：
    IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“prorein A"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。
    实验zui需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的说明书。特别是多抗的特异性是问题。
    其次，要注意溶解抗原的缓冲液的性质。多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强界面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面，如用弱界面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合，即使IP成功，也是很多蛋白与抗体共沉的悲惨结果。
    再次，为防止蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每抑制剂，低温下进行实验。
    每次实验之前，首先考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。欲速则不达，确定好比例很必要。（待续）
    二 准备：
    器械：    微量高速冷冻离心机    移液枪    旋转盘    电泳设备    vortex震荡器
    液氮及组织粉碎器    eppentube
    试剂：    细胞或组织    蛋白定量kit    SDS电泳试剂    抗体（单抗时选择protein G,二抗选择抗鼠Ig兔血清）    PBS    NaN3    proteinA sapharose
    试剂配制
    抗原蛋白溶解缓冲液
    1.RIPA缓冲液 （zui终浓度）
    1MTris-HCL（PH7.4） 5ml （10mM）
    5MNacl 15ml （150mM）
    0.5M EDTA（PH7.4） 5ml （5mM）
    20%TritonX-100 25ml （1%）
    10% DOC 50ml （1%）
    10%SDS 5ml （ o.1%）
    TLCK 18.5mg （0.1mM）
    TPCK 35mg （0.2mM）
    DDW 395ml
    toal 500ml
    另外，使用之前加1mMPMSF（PMSF溶在酒精，浓度100mM，-20度遮光保存。注意不易溶于水）
    2.NP40 lysis 缓冲液
    1MTris-HCL（PH7.4） 5ml （10mM）
    5MNacl 15ml （150mM）
    0.5M EDTA（PH7.4） 5ml （5mM）
    20%NP40 25ml （1%）
    TLCK 18.5mg （0.1mM）
    TPCK 35mg （0.2mM）
    DDW 450ml
    toal 500ml
    使用前加1mM的PMSF
    注意点：
    *Tris缓冲剂PH随温度变化，高浓度盐酸滴定时发热，冷却后PH增高。
    *反复使用PMSF要注意保管方法。
    *1和2的缓冲剂的区别在于界面活性剂。TritonX-100,NP40是非离子界面活性剂，作用温和，，DOC
*两方都有EDTA，对抗原而言，二价离子Mg,Ca等是必要的。根据自己需要调节。EDTA用NaOH滴定。