RA33抗体检测方法
时间:2011-09-21 阅读:357
免疫荧光法不是检测该类自身抗体的合适方法,因常出现阴性结果,即使存在价的hnRNP A2/RA33抗体,也不能显示出特征性核着染图形。此外因该抗体不形成沉淀物,故而免疫扩散方法也不适用。
以半纯化的hnRNP A/B为抗原的蛋白质印迹法是*的检测方法。核提取物不纯时也可应用,但在鉴别蛋白条带时可能会遇到困难,特别是SLE患者的血清。可用肝素琼脂糖层析法获得hnRNP制剂,进行12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,转印在硝酸纤维素膜上。血清用含3%的脱脂奶粉的20mm01/LTris-HCl或pH7.4磷酸盐缓冲液做1:25稀释,与膜上抗原一起孵育40min。在孵育液中应避免含有去垢剂诸如TritonX-lOO或Tween20,因为据推测去垢剂将导致SLE血清的DNA-抗DNA免疫复合物的非特异性结合引起假阳性的结果。推荐在免疫检测中应用碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体,原因是某些过氧化物酶标记的抗体可引起非特异性的染色,尤其是在hnRNP-A2带。因为在SDS凝胶中蛋白移行成双联体,所以抗hnRNP-A1染色在大约33/34kD处可出现双带。抗hnRNP-A2/:RA33在大约36kD处染色成一带,除此之外在37邝8kD处相应于hnRNP-B1/B2也有双联体。这些染色特征的出现被认为可以更好的解释蛋白质印迹的结果。
采用高纯度的天然hnRNP-A2的E1.ISA较蛋白质:印迹法的灵敏度为高,特别是在检测SLE和MCTD患者的血清方面。但是ELISA和蛋白质印迹的结果有时不一致,可能是因为暴露抗原决定簇的不同或者是识别了不同的抗原表位和(或)抗原的溶解度低有关。