通蔚生物带您了解细胞换液的方式有哪些
时间:2023-11-27 阅读:844
细胞换液是指去除旧的培养基,换成新的培养基以继续提供细胞充足的营养支持。当旧培养基 ph 值改变(含酚红的培养基通常是变酸发黄)时,需要及时进行换液。在培养细胞的过程中,换液是一项非常常规操作,它主要是为了清除细胞在生长过程中产生的各种代谢废物,补充新鲜的培养基,促进细胞生长。细胞换液主要有全换液和半换液两种方式,那么,不同方式的换液方法如何更换细胞培养瓶内的溶液呢?
换液前工作准备
环境准备:相对密封、防尘、防菌的无菌室
操作者准备:双手清洁呈可操作状态
物品准备:超净工作台、CO2培养箱、装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、废液缸。
工作准备:预热培养基,酒精棉擦拭培养基瓶外表面后移入生物安全柜/超净工作台。
细胞培养箱中取出的细胞,酒精棉擦拭培养瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超净工作台。可以稍等待,待生物安全柜中的循环风将试剂瓶和培养瓶的外表面吹拂几分钟后,拧开培养基瓶盖虚掩,拧开培养瓶瓶盖虚掩,培养皿盖不用拧。
第一种方式:细胞全换液
如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜培养基。
细胞全换液具体步骤
1.将器材放入超净台,打开紫外照射灭菌,若是培养的细胞对温度比较敏感,可以将含血清的培养基瓶放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭菌。另外,细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。
2.从培养箱取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒,转移到超净台,打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,可用移液器加入新鲜含血清培养基,注意一定不要从细胞贴壁面加入培养基,应从侧壁加,动作轻柔,以免冲落细胞。
3.加好培养基后,盖上盖子,在瓶子上做标记,注明换液时间,细胞种类,操作人员等信息。
4.放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶子表面,然后应记得整理操作台,用酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。
第二种方式:细胞半换液
“细胞半换液”又称“细胞半量换液”,即弃掉一半旧的培养基,再加一半新的进去。选它的原因其实与前面不加PBS的理由有点相近。
半换液原因
1.给细胞提供适应的缓冲环境;
2.细胞生长过程中可能会分泌某些生长因子,促进生长;
3.节省材料
4.方便操作:比如96孔板,换液很麻烦。所以常采用排枪进行半换液;
5.对于悬浮细胞的培养,有时也会选用半换液减低细胞密度;
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