关于ELISA试剂盒的固相载体原理
时间：2014-08-28 阅读：2523
为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定，然后比较结果。可作ELISA中载体的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA试剂盒中用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。
与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA试剂盒所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。其长处是表面积极大，反应在悬液中进行，其速率与液相反应近似。
在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别zui大，这种载体就是这一ELISA测定项目的zui合适的固相载体。小珠的另一特点是更易于使洗涤*，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中动弹淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。ELISA试剂盒常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG（一般为10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体，反应后用磁铁的吸引进行分离，洗涤利便，试剂盒一般均配以特殊仪器。
为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与尺度ELISA板相同。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附机能特别是对免疫球蛋白的吸附机能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空缺值较大。也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为ELISA试剂盒固相载体的。聚氯乙烯对蛋白质的吸附机能比聚苯乙烯高，但空缺值也略高。聚苯乙烯ELISA板因为原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其机能。
ELISA载体的外形主要有三种：微量滴定板、小珠和小试管。固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器，不介入化学反应。板式及珠式ELISA的标本量一般为100-200ul，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加有助于试验敏感性的进步。ELISA试剂盒现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操纵的尺度化极为有利。