EPEC-STEC-EHEC多重PCR检测试剂盒

【产品简介】

本试剂盒基于PCR技术，并适用于食品中EPEC、STEC和EHEC的检测。

【检测原理】

利用5对特异性引物和PCR反应所需其他试剂，如反应缓冲液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待检核酸样品，即可进行PCR扩增反应。经比对扩增产物目标条带组合即可判定所对应的致泻大肠埃希氏菌类别。

【产品特点】

1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用时减少溶液配制步骤，更为便捷，整个检测反应可在3 h内完成；

2. 特异性高：由GB 4789.6−2016《食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》提供的目标基因引物，保证扩增反应的高度特异性；

3. 判读简单：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和紫外仪观察目标条带即可判别，直观方便。

【储存条件与保质期】

2~8℃条件下储存，有效期为12个月。

【所需其他材料和适用仪器】

1. PCR仪器、高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心管等；

2. 琼脂糖、溴化乙锭（EB）或其他核酸染料。

【产品组分】

【使用指南】

1. 样品前处理

1) 参照GB 4789.6−2016，使用1 μL接种环刮取营养琼脂平板或斜面上培养18 h~24h的菌落，悬浮到含30 μL裂解液的无菌离心管中，充分悬浮菌体，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min；

2) 12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至0.2 mL无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。

2. 加样、反应

1) 使用时，分别加入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照管中，充分溶解，-20℃存储待用；

2) 取出冻干粉试剂EP和ST，按照需求分别剪取n个检测试剂管（n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每管加入18 μL复溶液，充分溶解后待用；

3) 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各2 μL，紧盖后置于PCR仪中按设定的反应程序进行扩增反应；

4) PCR反应程序如下：

3. 结果判读

反应后每管中加入4μL 6×Loading buffer，混匀，并取8 μL样品经1.5%琼脂糖凝胶电泳后在紫外仪下观察，阴性对照仅有uidA条带扩增，阳性对照中出现目标条带（参照图1），PCR试验结果成立。根据每个样品对应的冻干粉试剂EP和ST反应产生的目标条带种类，并查找该目标条带组合所对应的致泻大肠埃希氏菌类别（参照表1），即为检测结果。若阴阳性对照管反应结果不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。