蛋白质系列

CAT#:RS90707-50

常温运输，4℃保存

RICKY

动植物总蛋白微量提取试剂盒

使用手册 

上海瑞齐生物科技有限公司                            shrqsw

产品及特点

本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。本产品的其主要特点是：

提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。

采用*的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。

适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。

得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。

一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。

规格及成分

运输及保存

常温运输，4℃保存，5X SDS-PAGE上样液短期4℃保存，*可放-20℃保存，有效期一年。

使用方法

使用前，请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50uL。

一：匀浆法

注意：对致密的实体组织（如肌肉），用Polytron式匀浆机匀浆处理。

• 称取动物或植物组织样品100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15 mL的塑料离心管中。
• 加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
• 将匀浆液全部转移到1.5 mL的塑料离心管中。
• 4℃ 12,000 g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
• 将上清液转移至一新的1.5 mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5× SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

二：直接研磨法

注意：可以使用玻璃和陶瓷的研钵，也可以使用与微量离心管式的研磨杵 

• 称取动物或植物组织样品100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到预冷的研钵或离心管中。
• 加入1ml溶液A，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可见的组织块。
• 将匀浆液全部转移到1.5 mL的塑料离心管中。
• 4℃ 12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
• 将上清液转移至一新的1.5 mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5× SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

三：液氮研磨法

注意：使用玻璃和陶瓷的研钵

• 取大约100 mg动物或植物组织样品，转移到预冷的研钵中。
• 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。
• 加入1ml溶液A溶解，然后将溶液全部转移到1.5 mL的塑料离心管中。
• 4℃ 12,000 g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
• 将上清液转移至一新的1.5 mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5× SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。

注意：

1．如果4℃ 12,000 g离心10分钟后得到的上清液中还有可见的沉淀，可以将上清转移到一个新的离心管中后再4℃ 12,000 g离心10分钟，以去除可见的小碎片。

2．植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质，可以在zui后得到的上清液中加入5倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置1小时或过夜，然后4℃ 12,000 rpm离心10 min，弃上清后室温风干，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性，不能再用于活性检测。