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大鼠活化素A ELISA试剂盒样本处理方法

时间:2011-12-07      阅读:426

大鼠活化素A ELISA试剂盒组成:

1. 酶联板:一块( 96 孔)
2. 标准品(冻干品):2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后静置10 分钟以上,然后反复颠倒 / 搓动以助溶解,其浓度为 10 ng/ml ,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成10 ng/ml ,5 ng/ml ,2.5 ng/ml ,1.25 ng/ml ,0.625 ng/ml ,0.312 ng/ml , 0.156 ng/ml ,样品稀释液直接作为标准浓度 0 ng/ml ,临用前 15 分钟内配制。如配制 5 ng/ml 标准品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 10 n g/ml的上述 标准品加入含有 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液: 1 × 20ml 。
4. 检测稀释液 A : 1 × 10ml 。
5. 检测稀释液 B : 1 × 10ml 。
6. 检测溶液 A : 1 × 120 μ l ( 1:100 )临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验 所需的总量配制( 100 μ l/ 孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 检测溶液 A 加 990 μ l 检测稀释液 A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液 B : 1 × 120 μ l/ 瓶( 1:100 )临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液 A 。
8. 底物溶液: 1 × 10ml/ 瓶。
9. 浓洗涤液: 1 × 30ml/ 瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。
10. 终止液: 1 × 10ml/ 瓶( 2N H2SO4 )。
11. 覆膜: 5 张
12. 使用说明书: 1 份

自备材料:
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。

大鼠活化素A ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法:

1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

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