瑞氏染液的配制
时间:2011-12-08 阅读:1111
(1) 瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm或1g 甲醇(AR)500ml或600ml
a.先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
b.再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
c.存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。
(2) 缓冲液的配制:
(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 配方2:1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鲜) 加至1000ml
置室温黑暗处,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染则应报废。
姬姆萨(Giemsa's stain;天青-伊红)染色
1.姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青(蓝)2号合成的。
2.姬姆萨染料( Giemsa, 天青-伊红)染液配制:
姬姆萨染料(粉末) 0.5g或7.5g 甲醇(AR) 33ml 或500ml 甘油(AR) 33ml或 500ml
a.先将姬姆萨染料放入乳钵中,逐渐倒甘油研磨溶于甘油中,置于56℃水温箱内,90~120分钟,然后加入甲醇,摇匀后放置数天,过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处,时间越长越好。
b.使用染液可临时配置):姬姆萨染液1ml,加DDH2O10ml混匀。即可使用。
(3)缓冲液作用:
a.染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。
b.缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,
c.偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使pH恒定。