PCR-ELISA端粒酶检测法
时间：2011-04-22 阅读：437
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性（人重复序列为TTAGGG）。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合（如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失）中起重要作用。
由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的zui末端，多数正常体细胞的端粒末端每经一个复制循环就进行性缩短。这一现象在体内和体外都得到证实，并且可能与真核生物的正常体细胞有限的繁殖能力有关。
这一活性可能在与细胞衰老有关的情况中起作用。与体细胞相对照，生殖细胞是永生性的，它需要为将来器官形成保存全部的遗传信息。因此它必须对抗端粒缩短。这一工作通过在基因组染色体的末端添加新的端粒重复序列而完成。
端粒酶是一种核糖核蛋白，它们用自身的RNA成份的互补序列作模板，催化TTAGGG重复序列加到染色体末端。在大多数永生性细胞株和肿瘤细胞株中也可见端粒酶活性的表达。端粒酶反应超越了细胞的增殖限制，这可能是恶性肿瘤发生的一个先决条件。
传统的端粒酶研究方法是以探针延伸为基础测定端粒酶活性。由于需要大量的样品材料，且检验灵敏度受局限,这一方法已被端粒重复扩增法（omericRepeatAmplificationProtocol,TRAP）所取代。
标准的TRAP测定是通过PCR扩增端粒酶反应的产物，使用放射性标记，经凝胶电泳后，通过放射自显影显示结果。
这里介绍使用非放射性标记的检测端粒酶的新方法：活性光密度酶联免疫测定法。这种方法具有如下特点：安全，无需使用放射性同位素一步反应，使用即用的混合物使端粒酶介导的引物延伸和PCR扩增可在一个试管中进行。应用广泛，扩增后可适用于不同分析法。灵敏，与放射性同位素TRAP测定相当。可靠，准确、重复性好。快速，6-8小时得到结果。