怎样提高ELISA的敏感性—ELISA放大系统
时间：2014-01-20 阅读：568
一，生物-亲和素系统（Biotin-AvidinSystem，简称BAS）
*与抗*之间具有*的亲和力，可以缩短反应时间，达到快速检测的目的。另外，抗体和酶的*标记率高，又不影响其活性，每个亲和素分子能结合4个*，每个*能标记大量酶分子，使得ELISA的敏感性大大提高，*与亲和素的结合也极为稳定，不会在洗涤过程中脱落。BA-ELISA是在常规ELISA的基础上，结全*（Biotin）与亲和素（Avidin）的高度放大作用，形成的一种检测方法。BA-ELISA分为:
1，LAB法即酶联亲和素-*标记法（Labeledavidin-biotin，简称LAB）。用辣根过氧化物酶直接标记亲和素，用*标记第二抗体。
2，ABC法即酶联亲和素-*-过氧化物酶复合物法（Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex，简称ABC）。如用链霉亲和素（Streptavidin），则形成链霉亲和素-酶联*复合物（Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex，简称SABC）。在ABC法中，用*标记第二抗体，又用*标记过氧化物酶。在使用前30min，亲和素与酶联*以1:1的比例混匀。1个亲和素分子结合3个*分子，亲和素剩下的1个结合点与标记第二抗体的*结合，亲和素起桥联作用。ABC法比PAP（Peroxidase-antiperoxidasetech-nique）法敏感几十倍。
3，BAB法即酶联亲和素-*桥法（Bridgedavidin-biotin，简称BAB）。用游离亲和素（或链霉亲和素）作为桥联剂，将*标记后开成的复合物与酶标记*连结起来，然后进行样品的检测。由于标记抗体分子上连有多个*，因此，zui终形成的抗原-*标记抗体-亲和素-酶标*复合物可积聚大量的酶分子；加入相应底物后，产生强烈的酶促反应，大幅度提高检测的灵敏度。
二，碱性磷酸酶放大系统
碱性磷酸酶广大系统包含多种放大机制:碱性磷酸酶不直接催化底物生成有色产物而是催化生成辅酶I（NAD+），辅酶I激活下一轮氧化还原反应，辅酶I启动的反应为底物的颜色化学转变提供条件。在供氢体的作用下，底物氧化/还原发生颜色变化。
三，微粒放大系统
每个适当的微粒表面可以同时结合（或吸附）大量的标记酶和抗体分子。在包含微粒放大系统的夹心ELISA法中，微粒通过结合于其上的第二抗体结合于*抗体。同时微粒上又结合着标记酶，其数量大大多于第二抗体能结合的标记酶，从而得以放大。
四，催化的显示剂沉积
催化的显示剂沉积（Catalyzedreporterdeposition，简称CARD）。CARD依次使用三套显示剂:*套显示剂是联在抗体上的HRP，它通过抗体与待测抗原的反应结合于固相表面；第二套显示剂是标有*的*，它受到*显示剂的氧化催化后沉积于固相表面；第三套显示剂是标在链霉亲和素（Streptavidin）上的AP，可被固相上的*捕获，放大效果非常大。
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