胶原酶IV型细胞分离液

商品属性：

商品介绍：

本品为IV型胶原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特别适用于胰岛组织的消化。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分别能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘an酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：

1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、yi蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；

4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

酶活力单位定义

在37℃，pH7.5 的条件下，5h内水解胶原产生相当于1μM L-亮氨的酶量定义为1个酶活力单位。

储存条件：4℃避光，有效期两年

步骤和注意事项：‌

准备实验环境：‌确保实验区域清洁，‌使用酒精清洁计数板和盖玻片，‌然后用吸水纸轻轻擦干。‌

细胞培养：‌

准备试管或培养皿、‌细胞培养基和待培养的细胞。‌

取出保存于低温下的细胞苗，‌并加入培养基中，‌摇晃混合均匀。‌

用移液管将细胞培养基和细胞种植在试管或培养皿中。‌

将试管或培养皿放置于恒温培养箱中，‌定期更换培养液。‌

细胞冻存与复苏：‌

细胞系的冻存是将生长较好的传代细胞悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，‌以一定的冷冻速率降至零下某一温度，‌并在此温度下对其长期保存的过程。‌

复苏则是将冻存的细胞系恢复到常温的过程，‌原则是“慢冻快融”，‌以较大限度地保存细胞活力。‌

细胞计数：‌

制备细胞悬液，‌使用消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，‌制成单个细胞悬液。‌

在显微镜下，‌用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，‌细胞压中线时，‌只计左侧和上方者，‌不计右侧和下方者。‌

荧光显微镜使用：‌

使用荧光染料对细胞进行染色，‌并观察细胞所发出的荧光信号，‌以研究细胞结构和功能。‌

聚合酶链反应（‌PCR）‌：‌

准备PCR反应所需的DNA模板、‌引物、‌聚合酶和核苷酸。‌

按照PCR反应液配制表制备反应液。‌

在反应器中加入反应液，‌开始PCR反应。‌

PCR反应的成功与否，‌可以通过电泳、‌测序等方法进一步确认。‌

转染：‌

准备转染所需的载体DNA和细胞。‌

制备转染试剂，‌将DNA载体溶解于转染试剂中，‌与细胞混合均匀。‌

处理转染细胞，‌并进行下一步实验。‌

在操作过程中，‌应注意实验室安全规范，‌避免随意丢弃垃圾，‌及时登记购买耗材或试剂，‌保持实验环境的清洁和安全

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