Percoll细胞分离液

商品属性：

商品介绍：

Percoll是一种适用性广且操作灵活简单的低密度梯度分离液，可用来分离细胞，亚细胞颗粒，细菌，病毒，甚至实现受损细胞及其碎片与完整活细胞的分离。Percoll主要由表面包被单层乙烯烷酮（PVP）的硅胶颗粒组成，直径15-30 nm，游离PVP的含量仅占1-2%。由于颗粒大小的异质化，离心过程以不同的速率沉淀，自发产生一个匀质化且等渗的梯度，密度在1.0-1.3 g/ml之间。大部分沉淀系数＞60S的生物颗粒都可以用Percoll实现分离。

本品是无菌的溶液，呈无色至浅黄色，具有以下几大特点，

1）Percoll形成的梯度密度范围在1.0-1.3 g/ml之间，整个梯度体系都是等渗的；

2）无细胞毒性，化学惰性，不会粘附到细胞膜上；

3）可调节至生理离子强度和pH；

4）温和条件分离细胞，亚细胞颗粒和较大病毒（低至~70S），可保持其活力和形态完整性；

5）只需角转头中速离心即可实现预成梯度或者自发形成梯度分离；

6）Percoll粘度低（10±5 cP at 20℃），能够快速形成梯度和颗粒分离；采用预制梯度分离低速离心力（200-1000×g）仅需数分至数十分钟即可达到满意的分离结果；

7）Percoll稳定性高，未开封的产品室温保存5年有效；开封的产品室温无菌保存至少2年有效；

8）Percoll（未稀释）可重新高压灭菌，120℃，30min；

储存条件：4-30℃，有效期5年

步骤和注意事项：‌

准备实验环境：‌确保实验区域清洁，‌使用酒精清洁计数板和盖玻片，‌然后用吸水纸轻轻擦干。‌

细胞培养：‌

准备试管或培养皿、‌细胞培养基和待培养的细胞。‌

取出保存于低温下的细胞苗，‌并加入培养基中，‌摇晃混合均匀。‌

用移液管将细胞培养基和细胞种植在试管或培养皿中。‌

将试管或培养皿放置于恒温培养箱中，‌定期更换培养液。‌

细胞冻存与复苏：‌

细胞系的冻存是将生长较好的传代细胞悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，‌以一定的冷冻速率降至零下某一温度，‌并在此温度下对其长期保存的过程。‌

复苏则是将冻存的细胞系恢复到常温的过程，‌原则是“慢冻快融”，‌以较大限度地保存细胞活力。‌

细胞计数：‌

制备细胞悬液，‌使用消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，‌制成单个细胞悬液。‌

在显微镜下，‌用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数，‌细胞压中线时，‌只计左侧和上方者，‌不计右侧和下方者。‌

荧光显微镜使用：‌

使用荧光染料对细胞进行染色，‌并观察细胞所发出的荧光信号，‌以研究细胞结构和功能。‌

聚合酶链反应（‌PCR）‌：‌

准备PCR反应所需的DNA模板、‌引物、‌聚合酶和核苷酸。‌

按照PCR反应液配制表制备反应液。‌

在反应器中加入反应液，‌开始PCR反应。‌

PCR反应的成功与否，‌可以通过电泳、‌测序等方法进一步确认。‌

转染：‌

准备转染所需的载体DNA和细胞。‌

制备转染试剂，‌将DNA载体溶解于转染试剂中，‌与细胞混合均匀。‌

处理转染细胞，‌并进行下一步实验。‌

在操作过程中，‌应注意实验室安全规范，‌避免随意丢弃垃圾，‌及时登记购买耗材或试剂，‌保持实验环境的清洁和安全

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