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人外生骨疣蛋白1(EXT1)重组蛋白
1、组织蛋白提取
1)所需器材:制冰机、标记笔、两套1.5ml EP管(高温高压处理)、一个大冰盒、一个1.5ml EP管盒、手套、眼科剪(高温高压处理)、新鲜组织或保存于-80℃冰箱组织、保存于4℃冰箱的PBS(高温高压处理)、移液枪、吸头(高温高压处理)、两套研磨棒(高温高压处理)、掌上离心机、滤纸、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟(PMSF,一种蛋白酶抑制剂,剧毒)、离心机、烧杯、2×SDS凝胶上样缓冲液、二硫苏糖醇(DTT)、震荡器、泡沫板。
种属 | (Human,人) | 型号 | CS-D852 |
纯度 | > 95% | 性状 | 冻干粉 |
用途 | 仅供科研实验 | 规格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
产品名称:外生骨疣蛋白1(EXT1)重组蛋白
英文名称:Recombinant Exostoses 1 (EXT1)
EXT; Ttv; LGCR, LGS; Langer-Giedion Syndrome Chromosome Region; Glucuronosyl-N-acetylglucosaminyl-Proteoglycan 4-Alpha-N-Acetylglucosaminyltransferase
型号:CS-D852
酶与激酶
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位::分泌
预测分子量:25.9kDa
实际分子量:27kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Cys334~Arg549 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 95%
等电点:9.3
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10μg50μg200μg1mg5mg
a.制冰机制冰;
b.标记笔将两套EP管做好标记;
c.将大冰盒、EP管盒装上冰,一套标记笔做好标记的EP管放置于大冰盒中,另一套标记笔做好标记的EP管放置于EP管盒中,戴好手套,带上EP管盒、眼科剪剪取黄豆大小(约100mg)新鲜组织或保存于-80℃冰箱组织;
d.取出保存于4℃冰箱的PBS,往EP管中滴加1ml PBS,眼科剪剪碎组织(动作快),掌上离心,弃上清,再往EP管中滴加1ml PBS,研磨棒研磨,3000转离心10分钟,弃上清,滤纸尽可能吸干管口残留液体,估算EP管中沉淀物体积,以上步骤尽可能在冰上操作;
e.从4℃冰箱取出三去污裂解液,-20℃冰箱中取出PMSF置于大冰盒中,往EP管中滴加沉淀物3-5倍体积的三去污裂解液(一般为5倍),再加入PMSF(二者比例为94:6),研磨棒研磨(冰上充分裂解20-30分钟),以上步骤均需在进行;
f.离心机预冷,将充分裂解后的组织液4 ℃、10000转离心10分钟;
g.将烧杯用自来水洗净,倒入单蒸水,电炉上煮沸;
h.备好2×SDS凝胶加样缓冲液(存放于常温),取出保存于-20℃冰箱的DTT,置于大冰盒中,将离心后的上清液用移液枪定量吸至另一套EP管中(勿吸取下层沉淀物),按上清液:2×SDS:DTT =1: 0.8:0.2加入2×SDS 及DTT,掌上离心,然后小心将EP管插入泡沫板,投入已煮沸的烧杯中煮6-8分钟(电炉功率不要调太大,以免管盖爆开);
i. 将泡沫板用镊子取出,置大冰盒中冷却10分钟,掌上离心,再放入-20℃冰箱保存备用。
注意:裂解液也可酌情选用单去污裂解液或细胞裂解液等。
2、贴壁细胞蛋白提取(细胞蛋白含量一般约为1x10-9mg/细胞)
1)所需器材:制冰机、细胞刮刀、标记笔、两套1.5ml EP管(高温高压处理)、两个大冰盒、手套、长满细胞的培养瓶、保存于4℃冰箱的PBS、三去污裂解液、苯甲基磺酸氟(PMSF,一种蛋白酶抑制剂,剧毒)、移液枪、吸头(高温高压处理)、滤纸、离心机、烧杯、4×SDS凝胶上样缓冲液、二硫苏糖醇(DTT)、泡沫板。
钙同线蛋白2ELISA试剂盒 | 小鼠碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅱ(DIO2)重组蛋白 |
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人前胶原C内肽mei增强子1(PCOLCE1)试剂盒ELISA | 小鼠胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)重组蛋白 |
人抑制suA(INH-A)ELISA试剂盒 | 小鼠泛素结合酶E2A(UBE2A)重组蛋白 |
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