钩端螺旋体通用探针法荧光定量PCR试剂盒

【质控标准】

1.   阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；

2.   阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；

3.   以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。

英文名称：Leptospira spp.
型号：CSP916871

规格：50T

分类：探针法荧光定量PCR试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！

规格及成分：

PCR检测试剂盒流程示意图：

【结果分析条件设定】

u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。

u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的高点。

实验操作：

1. 模板制备（样本制备区）

建议使用配套水生动物病害基因组 DNA/RNA 提取试剂盒系列产品，具体过程详见产品说明书。

2．添加模板（模板添加区，放置于冰盒中进行）

请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月

取出所需测试数的已含有反应液 A-TSV-I 的 PCR 管，将试剂解冻，离心 30 秒，在管盖上标记管名（阴性对照管 NG、样品 XX、阳性对照管 PG）。打开管盖向各管管底分别加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，盖上阴性对照管管盖，其他各管分别沿管壁加入 2μL 模板，顺序为待测样品模板、PG-TSV-I，依次盖好各管管盖，离心 30 秒，立即进行扩增反应。

3. 扩增反应（扩增及产物分析区）

①恒温仪器 63℃条件下反应 60 min。待仪器升温至 63℃后，新建程序，设置实验名称及反应时间，将步骤 2中离心后的 PCR 反应管放入恒温荧光分子检测仪，点击开始检测。

②若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，60 个循环。

其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

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