实验目的：

本试剂盒用于测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中诱导型一氧化氮合成酶TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α的含量。

商品属性：

实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α。用纯化的TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α，再与 HRP 标记的TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α抗体结合，形成抗体抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中TNF-α 兔子肿瘤坏死因子α浓度。

检测原理：

1. 抗原-抗体反应

ELISA的基础是抗原-抗体反应。抗原是一种能够与抗体结合的物质，而抗体则是免疫系统产生的蛋白质，能够识别并结合抗原。抗原-抗体结合是高度特异的，因此ELISA能够准确地检测样本中的抗原或抗体。

2. 酶联免疫吸附试验

TNF-α 兔子肿瘤坏死因子αelisa试剂盒在ELISA中，抗原或抗体被吸附在固相载体表面。常用的固相载体包括聚苯乙烯、尼龙等。载体表面经过特殊处理，可以增强其与抗原或抗体的结合能力。将酶标记的二抗加入反应体系中，二抗能够与抗原或抗体结合，形成酶标抗原-抗体复合物。

3. 底物显色反应

在加入底物后，酶标抗原-抗体复合物与底物发生显色反应，产生颜色变化。底物可以是显色剂，也可以是荧光染料。显色反应的强度与抗原-抗体复合物的量成正比，因此可以通过测量光密度值来定量分析样本中的抗原或抗体。

4. 终止反应

显色反应持续一定时间后，需要加入终止液终止反应。终止液可以使酶失活，停止显色反应。终止液一般是酸或碱溶液。

5. 检测与分析

终止反应后，将固相载体放入多功能酶标仪中测量各孔的光密度值。通过标准曲线可以得出样本中抗原或抗体的浓度。标准曲线是通过检测已知浓度的标准品绘制而成的。
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注意事项：

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。