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¥1200实验目的:
本试剂盒用于测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中诱导型一氧化氮合成酶FT4 猪游离甲状腺素的含量。
商品属性:
产品名称 | 英文名称 | FT4 ELISA Kit | |
货号 | CS-0228E | 规格 | 48T/96T |
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中FT4 猪游离甲状腺素。用纯化的FT4 猪游离甲状腺素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加FT4 猪游离甲状腺素,再与 HRP 标记的FT4 猪游离甲状腺素抗体结合,形成抗体抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的FT4 猪游离甲状腺素呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中FT4 猪游离甲状腺素浓度。
检测原理:
1. 抗原-抗体反应
ELISA的基础是抗原-抗体反应。抗原是一种能够与抗体结合的物质,而抗体则是免疫系统产生的蛋白质,能够识别并结合抗原。抗原-抗体结合是高度特异的,因此ELISA能够准确地检测样本中的抗原或抗体。
2. 酶联免疫吸附试验
在ELISA中,抗原或抗体被吸附在固相载体表面。常用的固相载体包括聚苯乙烯、尼龙等。载体表面经过特殊处理,可以增强其与抗原或抗体的结合能力。将酶标记的二抗加入反应体系中,二抗能够与抗原或抗体结合,形成酶标抗原-抗体复合物。
3. 底物显色反应
在加入底物后,酶标抗原-抗体复合物与底物发生显色反应,产生颜色变化。底物可以是显色剂,也可以是荧光染料。显色反应的强度与抗原-抗体复合物的量成正比,因此可以通过测量光密度值来定量分析样本中的抗原或抗体。
4. 终止反应
显色反应持续一定时间后,需要加入终止液终止反应。终止液可以使酶失活,停止显色反应。终止液一般是酸或碱溶液。
5. 检测与分析
终止反应后,将固相载体放入多功能酶标仪中测量各孔的光密度值。通过标准曲线可以得出样本中抗原或抗体的浓度。标准曲线是通过检测已知浓度的标准品绘制而成的。
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注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。