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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）ELISA试剂盒使用说明书

检测原理:

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法:

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。

3.细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品:

1.37℃恒温箱

2.酶标仪（450nm）

3.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

操作注意事项:

1.所有液体组分使用前充分摇匀。

2.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

3.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。

4.浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5 倍，zui终结果乘以5 才是样本实际浓度。

5.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

试剂盒组成:

名称96孔配置48孔配置备注;

微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无;

标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无;

样本稀释液6mL 3mL 无;

检测抗体-HRP 10mL 5mL 无;

20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释;

底物A 6mL 3mL 无;

底物B 6mL 3mL 无;

终止液6mL 3mL 无;

封板膜2 张2 张无;

说明书1 份1 份无;

自封袋1 个1 个无;

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400 ng/mL.

试剂的准备:20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20 稀释，即1 份的20×洗涤缓冲液加19 份的蒸馏水。

洗板方法:

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5 次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。

操作步骤:

1.从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断:绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能:

1.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

2.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于0.9900。

4.灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 ng/mL。

5.贮藏:2-8℃，避光防潮保存。

6.有效期:6个月