RAW264.7细胞_选型注意问题
时间:2018-04-11 阅读:1142
在体细胞克隆猴的成果发布会上,神经科学研究所所长蒲慕明院士对媒体说,克隆猴的成功,将为阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病以及免疫缺陷、肿瘤、代谢性疾病的机理研究、干预、诊治带来的光明前景。继“大师兄”被克隆以来,能模拟人类疾病的“二师兄”也成功地被克隆出来。这是利用基因编辑技术CRISPR/Cas9和体细胞核移植技术(SCNT),成功培育出世界*亨廷顿舞蹈病基因敲入猪,地模拟出人类神经退行性疾病。
RAW264.7细胞,上海拜力生物公司细胞近3000种,来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制,在中国大陆努力搭建正牌细胞与国内广大科研人员之间的沟通桥梁。为您提供RAW264.7细胞外,还有更多相关实验产品,标准品,细胞株和实验技术服务等等前期后续服务。
1. RAW264.7细胞液体培养基的保存是冷藏好?还是冷冻好?
要冷藏!!因为液体培养基经冷冻后再经溶化时,其溶液的pH值会发生改变,溶液往往变碱,某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中,通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。
2.RAW264.7细胞 液体培养基中的作用,及使用方法。
几乎所有的细胞对有较高的要求,细胞需要合成蛋白质,在缺少时,细胞生长不良而死亡。所以,各种培养液中都含有较大量的。在溶液中很不稳定,应置-20 ?C冰冻保存,用前加入培养基中。加有的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度(100倍)的溶液(1ml/支)。每支1ml的加到99ml*培养基中,其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色,-24?C保存。
3. RAW264.7细胞 培养用液pH对细胞生长的影响
由于,大多数细胞适宜pH为7.2~7.4,偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不*相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。
但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些,偏酸环境中更利于细胞生长。因此,我们在配制培养用液时,可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
4.RAW264.7细胞 细胞传代消化时所用浓度越高越好吗?
不见得!因为溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下,pH 8.0 , 温度 37 oC 其作用能力zui强。另外,钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶,以便于将含血清的培养基冲洗干净,这样就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液浓度为:
(1)0.05%+0.02%EDTA;
(2)0.25%+0.03%EDTA。
(3)0.25%
溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。
多数细胞传代消化可使用0.05%+0.02%EDTA这种消化液。
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一、客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;
收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
二、如为贴壁细胞,请在显微镜下观察细胞密度:
1. 未超过80%汇合度时,用75%酒精(建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水,喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作;然后打开盖子,先用枪头把培养基吸出10ml左右,放在离心管里,然后瓶口过火(严禁直接倾倒),这样可以保证不污染,再用10ml的移液管,将剩余的培液全部吸出,放于离心管中,培养瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培养16hr(时间根据细胞生长情况调整)之后,传代或者冻存。
2. 超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。具体步骤如下:
1) 弃去培养液,用3ml PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次;
2) 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于T25培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来;
3) 加入6-8ml*培养基,吸出,分到新的培养瓶中,按要求分瓶。
三、如为悬浮细胞,吸出培养液,1000转/分钟离心5分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
注意:换液时一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
四、细胞出现问题,可重发的情况有哪些?判定标准是什么?
(1)细胞运输途中遭遇的各种问题,细胞丢失、破损、漏液等,重发;
(2)冻存的细胞复苏后,绝大多数细胞未存活,重发;
(3)存活的细胞静置24小时后,绝大多数细胞未存活,重发;
(4)冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封,出现污染,重发;
(5)视具体情况而定。
五、细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
(1)客户造成细胞污染,不重发;
(2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
(3)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
(4)细胞培养时经其它处理的,不重发;
(5)细胞收到2天内,未告知,不重发;
(6)视具体情况而定。
六、售后服务政策
Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分产品现货,超低比价,另常备 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常备现货 ;货期短,价格优,售后齐全。
细胞污染问题,请在收到产品48小时内,给我们提出真实的实验结果;细胞活性问题,请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果,我们调查核实后予免费调换,不收取任何费用。
需要客户提供RAW264.7细胞细胞培养说明、细胞操作处理方法、细胞质量问题反馈表。
如用户收到细胞8-30天之内,因处理不当造成细胞死亡或污染,我公司将优惠价重新提供一株原细胞
RAW264.7细胞质量可靠,售后有保障
★我库细胞近3000种,来源于美国ATCC,细胞都是经过严格质量控制。
冻存细胞时间为5-7个工作日,活细胞为7-15个工作日。
★由于细胞库现有细胞类目多,为了不出现混乱错误,需要了解RAW264.7细胞相关细胞价格及详细资料请老师,对您造成的不便还请见谅!
(编辑:tanxi)