货号：WT-E5291【犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA试剂盒酶免法】ELISA的操作要点

优质的试剂，  良好的仪器和正确的操作是保证 ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异， 国内医学检验一般均用板式点。 本文将叙述板式 ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作， 必能得出准确的结果。

【犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA试剂盒酶免法】4. 1标本的采取和保存

可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定（如血清、尿液），有些则需经预处理（如粪便和某些分泌物）。大部分 ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外， 其他成份均同等于血清。 制备血浆标本需借助于抗凝剂， 而血清标本只要待血清自然凝固、 xue块收缩后即可取得。除特殊情况外，在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以 HRP为标记的 ELISA测定中， 溶血标本可能会增加非特异性显色。

血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂（见3.2.4）。

【犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA试剂盒酶免法】4.2试剂的准备

按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。 ELISA中用的蒸馏水或去离子水， 包括用于洗涤的，

应为新鲜的和高质量的。 自配的缓冲液应用 pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。 试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

【犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA试剂盒酶免法】4.3加样

在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。 加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器， 使加液过程迅速完成。

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【犬主要组织相容性复合体(MHC/DLA)ELISA试剂盒酶免法】