样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒温箱

操作注意事项

1.   大鼠（Rat）骨碱性磷酸酶（BALP）酶免检测试剂盒试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。
2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.   浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，zui终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

大鼠（Rat）骨碱性磷酸酶（BALP）酶免检测试剂盒试剂盒组成

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.   样本孔先加待测样本10μL，再加*40μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

•  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
•  灵敏度：zui低检测浓度小于0.1 ng/mL。
•  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
•  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
•  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
•  有效期：6个月

免责声明

•   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
•   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

  样品收集、处理及保存方法

  1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

  2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

  3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

  4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

  5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  自备物品

• 酶标仪（450nm）
• 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
• 37℃恒温箱

• 操作注意事项

•   试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解后再使用。
•   实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
•   浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，zui终结果乘以5才是样本实际浓度。
•   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
•   所有液体组分使用前充分摇匀。

• 试剂盒组成

  名称	96孔配置	48孔配置	备注
  微孔酶标板	12孔×8条	12孔×4条	无
  标准品	0.3mL*6管	0.3mL*6管	无
  *	6mL	3mL	无
  检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
  20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
  底物A	6mL	3mL	无
  底物B	6mL	3mL	无
  终止液	6mL	3mL	无
  封板膜	2张	2张	无
  说明书	1份	1份	无
  自封袋	1个	1个	无

  注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL

  试剂的准备

   20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

  洗板方法

•   手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
•   自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

• 操作步骤

•   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
•   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
•   样本孔先加待测样本10μL，再加*40μL；空白孔不加。
•   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
•   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
•   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
•   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

• 结果判断

   绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

   

  试剂盒性能

•  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
•  灵敏度：zui低检测浓度小于0.1 ng/mL。
•  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
•  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
•  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
•  有效期：6个月

• 免责声明

•   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
•   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。