潮霉素B Hygromycin B类型

我司提供两种产品形式的潮霉素B。
 

一种以冻干粉形式提供，货号分别为：MS0003-1G，MS0003-5G，MS0003-10G。需要配制成储存液后备用。

一种以溶于PBS的无菌液体形式提供，货号为MS0003-20ML，使用更简单方便。
 

潮霉素B Hygromycin B产品特性
1）   化学名：O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)- 2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2）   同义名：Hygromycin B, from Streptomyces hygroscopicus 潮霉素质B，来源于吸水链霉菌

3）   CAS NO：31282-04-9

4）   分子式：C20H37N3O13

5）   分子量：527.53 g/mol

6）   外观：类白色至白色粉末

7）   纯度：≥90%（HPLC）

8）   效价：≥1050 U/mg

9）化学结构：

 

使用方法
1、   储存液制备

1）潮霉素B（粉末形式）：称取适量粉末溶于1×PBS配制成50mg/ml溶液，用0.22μm滤膜过滤除菌，置于2-8°C避光保存。

2）潮霉素B（溶液形式）：已是无菌储存液，直接用细胞培养液稀释到工作浓度即可使用。

2、   建议工作浓度

潮霉素B用来筛选稳定转染细胞株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化。1） 哺乳动物细胞 使用浓度为50-1000 μg/ml，常用筛选浓度为200 μg/ml，zuijia浓度需要杀灭曲线来确定2） 植物细胞 常用浓度：20-200 μg/ml；
3）   细菌常用浓度：20-200 μg/ml；
4）   真菌 常用浓度：200-1000 μg/ml；
 

3、杀灭曲线的建立

建议初次实验一定要建立杀灭曲线（kill curve），至少设立5个浓度，筛选到适合自身实验体系的zuijia浓度。
1）   将未转化细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃培养过夜；【注意】：对于需要更高密度以保证活力的细胞，增加接种量。
2）   第二日，用含梯度浓度潮霉素B的培养基替换旧培养基。比如，哺乳动物细胞常用浓度为50-1000μg/ml，可设50, 100, 250, 500, 750, 1000μg/m这6个浓度，各3个平行。同时设置一阴性对照，3个平行。
3）   接下来每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
4）   按照固定周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转化细胞生长的恰当浓度。选择在理想天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选所需的工作浓度。
 

4、稳转细胞的筛选
1）   转染48h后，用含zuijia筛选浓度潮霉素B的培养基进行细胞传代。【注意】：细胞处于活跃状态时抗生素的杀伤效果。当细胞密度过高，筛选效率会降低。为了得到较好的筛选效果，建议将细胞稀释至丰度不超过25%。
2）   每3-4日更换新鲜的含抗生素培养基。
3）   筛选7天后观察并评估细胞集落的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这些取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4）   挑取5-10个抗性克隆到35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5）   之后换用正常培养基培养即可。
 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 Hygromycin B 潮霉素B

产品标签

Hygromycin B潮霉素B；50mg/ml；Hph 潮霉素磷酸转移酶；遗传霉素G418；Blasticidin S 杀稻瘟菌素（灭瘟散）；Zeocin博莱霉素；CAS：31282-04-9

产品信息

产品描述
潮霉素B（Hygromycin B），从吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）分离到的一种氨基糖苷类抗生素。通过与30S核糖体亚基结合，诱导对mRNA模板的错读且抑制易位，从而以阻止蛋白合成。潮霉素B能杀死细菌、真菌和高等真核细胞。主要用来筛选和维持培养稳定转染Hph载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）。
 

对潮霉素B（Hygromycin B）的抗性来源于大肠杆菌潮霉素抗性基因（hph或hyg），该基因能编码潮霉素磷酸转移酶（hygromycin phosphotransferase），使得潮霉素B发生磷酸化从而失去活性。目前Hph抗性基因主要有两种来源，zui初来源是大肠杆菌（Escherichia coli），另一来源是潮霉素B产生菌吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）。如今，携带Hph抗性的载体大多来自大肠杆菌。