CoroNa Green, AM, Cell Permeant 钠离子指示探针

产品关键词

CoroNa Green, AM；Sodium indicator 钠离子指示剂（荧光探针）；SBFI AM；Asante NaTrium Green-2 AM；APG-2 AM；PBFI AM；Fluo-4 am；钾离子荧光探针；Gramicidin 短杆*-菌肽；CCCP；

产品信息

产品描述

CoroNa Green, AM是一种具细胞膜渗透性的钠离子（Na+）指示探针。一旦进入细胞后，经非特异性酯酶水解生成不具有膜渗透性的CoroNa Green，一旦与Na+结合，绿色荧光明显增强，但波长发生很少变化（见附图I）。与其他Na+指示探针SBFI（MX4533、MX4509）和ENG-2（MX4514、MX4534）一样，当存在生理浓度的其他单价阳离子时，CoroNa Green允许从时间和空间上来选择性分辨Na+浓度的变化。分子量更小的CoroNa Green（586），相比较于其他大分子量的Na+指示探针ENG-2（1087），在同等条件下，其膜渗透性的衍生物能更好的加载进入胞内。CoroNa Green能响应更广泛的Na+浓度范围（见附图II），Kd~80mM。不同于传统的SBFI，与Na+结合后的CoroNa Green的吸收和发射波长分别是492nm和516nm，因此，兼容于任何能检测荧光素（Fluorescein）的仪器，包括：流式细胞仪、荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪和荧光光度计。CoroNa Green是一款有价值的工具，用来分析细胞外和细胞内的钠离子水平[1-2]。

产品特征

1）   同义名：CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

2）   分子量：657.62 g/mol

3）   纯度：≥90%（HPLC）

4）   外观：固体

5）   吸收/发射波长：492/516nm

6）   解离常数（Kd）：~80mM

7）   溶解性：DMSO

保存与运输方法

保存：≤-20ºC避光干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1）   整个染色过程中需注意避光。

2）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（活细胞成像分析）

以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整。

1.1   储存液准备：于实验前，将低温保存的CoroNa Green AM从冰箱取出平衡至室温（至少20min），低速离心后再开盖，直接往管内加入高质量的无水DMSO配制成1-10mM储存液，比如：往50μg CoroNa Green, AM固体（Mw：657.62）加入15μl DMSO，充分溶解后配制成5mM储存液。≤-20ºC分装干燥冻存，避免反复冻融。

1.2   工作液准备：于实验前，用生理缓冲液比如：HHBS（MS3510-500ML）、HBSS（MS3505-500ML）或无血清培养基稀释一定量的储存液，使其工作浓度在0.5-10µM，初次使用务必摸索几个梯度浓度的探针，以确认适宜的工作浓度。工作液必须现配现用。

1.3   染色步骤：

1.4   荧光检测

应用示例（来自文献，仅做参考）

1）   文献来源：Fujishima A, Takahashi K, Goto M, Hirakawa T, Iwasawa T, Togashi K, Maeda E, Shirasawa H, Miura H, Sato W, Kumazawa Y, Terada Y. Live visualisation of electrolytes during mouse embryonic development using electrolyte indicators. PLoS One. 2021 Jan 29;16(1):e0246337. doi: 10.1371/journal.pone.0246337. PMID: 33513193; PMCID: PMC7845971.

实验目的（Na+imaging）：胚胎（从桑椹胚至孵化期）用0.5µM CoroNa Green AM加载，37℃孵育30min。之后，用LSM780共聚焦显微镜来测定胞内和/或囊胚腔的荧光强度。激发和发射波长分别是488nm和510-520nm，相同实验至少重复3次。

2）   文献来源：Fu T, Xu C, Li H, Wu X, Tang M, Xiao B, Lv R, Zhang Z, Gao X, Liu B and Yang C (2022) Salinity Tolerance in a Synthetic Allotetraploid Wheat (SlSlAA) Is Similar to Its Higher Tolerant Parent Aegilops longissima (SlSl) and Linked to Flavonoids Metabolism. Front. Plant Sci. 13:835498. doi: 10.3389/fpls.2022.835498

实验目的（Na+imaging）：小麦种子水培10天后，暴露于150mM NaCl溶液7天。之后加入CoroNa Green AM来观察小麦根部细胞内的Na+分布。小麦根部用含探针的染色工作液（20 μM CoroNa Green AM, 5 mM KCl, 5 mM Ca2+-MES, pH 6.1）避光孵育1h。用蒸馏水清洗染色部位。使用共聚焦成像仪（激发：488nm，发射：505-525nm）来观察根部的分生组织区和成熟区。

Fig. Effects of salinity stress on Na+ and K+ homeostasis in a synthetic tetraploid wheat line and its diploid parents. (A,B) Na+ distribution in root cell indicated by CoroNa Green AM under salinity stress. (C–F) Na+ and K+ concentration. The seedlings were exposed to 150 mM NaCl for 7 days. The values are the mean (± SD) of three biological replicates. Different letters above the bar showed significant differences among wheat lines and treatments according to t-test (P < 0.05).

3）   文献来源：Bortner, C.D., Oakley, R.H. & Cidlowski, J.A. Overcoming apoptotic resistance afforded by Bcl-2 in lymphoid tumor cells: a critical role for dexamethasone. Cell Death Discov. 8, 494 (2022).

实验目的（Determination of intracellular potassium, sodium, and calcium）：于检测前1h，取 2 ul 的2.5 mM CoroNa Green-AM (Na+) or PBFI-AM (K+) 储存液加入1ml细胞溶液中，使其终浓度为5 uM。于检测前30min，取4 ul的1mM Fluo-4加入1ml细胞溶液中。于37 °C, 7% CO2 中孵育细胞. 于流式分析前再加入PI使其工作浓度为10 ug/ml. 用装有FACSDiVa 软件的LSRII流式细胞仪进行数据分析。仅将碘化丙啶染色阴性的细胞进行相对的胞内离子浓度分析。

参考文献

[1] Naumann G, Lippmann K, Eilers J. Photophysical properties of Na+ -indicator dyes suitable for quantitative two-photon fluorescence-lifetime measurements. J Microsc. 2018 Nov;272(2):136-144. doi: 10.1111/jmi.12754. Epub 2018 Sep 7. PMID: 30191999.

[2] Sediqi H, Wray A, Jones C, Jones M (2018) Application of Spectral Phasor analysis to sodium microenvironments in myoblast progenitor cells. PLoS ONE 13(10): e0204611. http**-s://doi.org/10.1371/journal.pone.0204611

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