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¥318Laurdan (6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene)
脂膜荧光探针
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Laurdan脂膜荧光探针 | MX5405-5MG | 5mg | 369 |
Laurdan脂膜荧光探针 | MX5405-10MG | 10mg | 659 |
Laurdan脂膜荧光探针 | MX5405-50MG | 50mg | 2139 |
产品描述
6-丙烯酰基-2-二甲氨基萘(6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene,Laurdan),是一种极性敏感的荧光探针,用于膜内脂筏(Lipid rafts)的成像分析。适用于广义偏振(GP)成像和扫描荧光相关光谱(FCS)。适用于活细胞和固定细胞,以及用多光子显微镜检测的全组织成像分析。
Laurdan是由一条月桂酸长链连接到一个萘分子上组合而成。脂肪酸的疏水性尾使探针能牢牢嵌入脂质双分子层;而分子上的萘部分定位在膜磷脂的甘油骨架上。Laurdan的化学结构和膜定位性使其对脂质双分子层中水分子的存在和流动性都非常敏感。Laurdan在广义偏振的定量能用于鉴别磷脂相态。当用340nm激发,凝胶相的广义偏振值是0.6,液晶相的广义偏振值是-0.2。广义偏振仅随相态而变化,不会因一极性头部或4-10范围内的pH变化而变化。
产品特性
1) CAS NO.:74515-25-6
2) MDL NO:MFCD00467560
3) 化学名:1-[6-(Dimethylamino)-2-naphthalenyl]-1-dodecanone
4) 分子式:C24H35NO
5) 分子量:353.54
6) 纯度:≥98%
7) 外观:固体
8) 溶解性:溶于DMF (10mM)
9) 荧光:λex/ λem =366/497 nm (methanol)
【注意】:Laurdan插入膜后,荧光光谱对周围磷脂生理状态非常敏感。最大激发和发射波长分别是366/497nm。在膜的凝相态和液相态的最大发射波长分别为~440n和~490nm。
10)化学结构式:
保存与运输方法
保存:2-8ºC避光干燥保存,亦可置于-20ºC避光干燥延长保存,至少2年有效。
运输:室温运输。
注意事项
1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品使用
一、 储存液制备
将低温保存的Laurdan(Mw: 353.54)置于室温回温至少20min,低速离心后加入一定量的DMF配制成适量浓度的母液,比如10mM(往5mg粉末加入1.41ml DMF,充分溶解即可)。根据单次用量将储存液分装,≤-20℃避光干燥保存(-20℃ 1-2个月内使用;-80℃保存3-6个月内使用)。需注意溶液内湿度的逐渐积累会随着时间引起探针聚集,从而务必干燥保存储存液。
二、 染色工作液制备
用HHBS、HBSS、不含血清的基础培养基或无血清培养基等稀释Laurdan储存液到适宜的工作浓度,比如:5-50µM。最佳的工作浓度需自行优化。染色工作液需现配现用。
三、 操作步骤(以细胞染色为例)
以下操作步骤仅做参考,用户需结合自身的实验目的和实验条件来优化整个实验流程。
应用示例(来自文献,仅做参考)
文献1)Pilkington, E., Gurzov, E., Kakinen, A. et al. Pancreatic β-Cell Membrane Fluidity and Toxicity Induced by Human Islet Amyloid Polypeptide Species. Sci Rep 6, 21274 (2016).
实验目的:Laurdan用来测定细胞膜相态(Lipid order)和比率成像分析。
实验方法:
j储存液:Laurdan溶于DMSO配制成4mM储存液。
k染色流程:a)MIN6小鼠胰岛β细胞接种到包被有多聚赖氨酸的8孔板,培养过夜。b)成像前,去除旧培养基,更换不含血清的Opti-MEM,加入Laurdan染料使其工作浓度为50μM,加载至少30min使染料插入细胞膜达到平衡。c)将细胞转移到安装有细胞培养室的Leica SP8倒置共聚焦显微镜,选取每孔的适当区域(至少10个活细胞)进行观察。加入不同药物到相应孔内。以1-30min为时间点,收集2h内的成像数据。Lauran插入膜后用405nm激发线激发,分别读取430~470nm(代表脂膜处于凝胶/液态有序相)或480~550nm(代表脂膜处于液体不稳定相)。
染色示例:
Fig. Laurdan dye as an indicator of cell membrane lipid order and ratiometric imaging.
Laurdan (6-Dodecanoyl-2-dimethylaminonaphthalene) is a lipophilic dye capable of partitioning into cell phospholipid membranes (A). When excited at the 405 nm laser line, Laurdan emits fluorescence at 450 nm when the cell membrane is in the gel/liquid ordered phase (lo; left panel) and redshifts to 500 nm when the cell membrane is in the liquid disordered phase (ld; right panel). hIAPP monomers, oligomers and amyloid fibrils are predicted to cause lipid disorder (A). Intensity shifts between the ordered and disordered channels can be quantified as generalised polarisation (GP) values. A flowchart outlining the calculation of GP values from raw ratiometric confocal images in the ordered and disordered channels is represented by (B).
文献2)Mizuno M, Matsuzaki T, Ozeki N, Katano H, Koga H, Takebe T, Yoshikawa HY, Sekiya I. Cell membrane fluidity and ROS resistance define DMSO tolerance of cryopreserved synovial MSCs and HUVECs. Stem Cell Res Ther. 2022 May 3;13(1):177. doi: 10.1186/s13287-022-02850-y. PMID: 35505370; PMCID: PMC9066911.
实验目的:Laurdan用来测定细胞膜流动性(Cell membrane fluidity)。
实验方法:
j储存液:Laurdan溶于DMSO配制成9mM储存液。
k染色流程:于实验前将Laurdan储存液用RPMI 1640稀释到工作浓度(33μM),细胞于室温孵育30min。用共聚焦显微镜捕获细胞荧光图片。405nm激发光源,分别测定发射波长在406-460nm(I406–460)和470-530nm(I470–530)的荧光强度,计算广谱偏振(GP),从而评估膜流动性。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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