Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)
品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
细胞名称:Beta-TC-6 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞
组织来源:胰;胰岛素瘤
培养条件:DMEM+20% FBS
形 态:贴壁;上皮细胞样
背 景:这株细胞来源于转基因小鼠中生长的一个胰肿瘤(胰岛素瘤)。这种小鼠携带了大鼠胰岛素II基因启动子调控的SV40早期基因的假基因结构。细胞包含丰富的胰岛素和小量的胰高血糖素及*。响应葡萄糖而分泌胰岛素。
Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
formazan结晶的生成量仅与活Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。也可以用DMSO来溶解。MTT粉末和溶液保存时都需要避光,用铝箔纸包好就可以。实验的时候一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。
1.接种:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个接种到96孔板,每孔体积200ul.
2.Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)培养:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3.呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10分钟,使结晶物充分融解。
4.比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)生长曲线。