实验室细胞收集的具体方法步骤
时间:2016-11-10 阅读:1948
实验室细胞收集的具体方法步骤,实验室收集细胞,对于细胞的研究极为重要,如何收集细胞成为实验室的必做项目之一,那么下面金益柏的博士就带大家一起来了解下以下三种方法:
WB收集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,使用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保留底层细胞。如要裂解细胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),细胞培养皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白则加如1ul抑制磷酸化蛋白降解抑制剂,加入细胞裂解液后用移液器将细胞吹匀,冰上静置5min,离心4℃ 12500g/5min,吸取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解细胞,将细胞置于-80℃冰箱。
elisa试剂盒
普通PCR收集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,使用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保留底层细胞。将细胞置于-20℃冰箱。
qRT-PCR收集细胞:
将细胞培养基弃掉,用PBS清洗两次,使用*消化细胞或细胞刮,将细胞悬浊液离心1000rpm/5min,弃上清,保留底层细胞。加入1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(注意:本实验需使用耗材和试剂都为无RNA酶,PBS必须高压,离心管和枪头必须无酶