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猪瘟抗体(CSF-Ab)elisa试剂盒的试剂准备:
1.标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
500pg/ml | (6号标准品) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
250pg/ml | (5号标准品) | 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液 |
125pg/ml | (4号标准品) | 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
62.5pg/ml | (3号标准品) | 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
31.2pg/ml | (2号标准品) | 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
15.6pg/ml | (1号标准品) | 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液 |
0pg/ml | (空白对照) | 原倍浓度不用稀释直接加入50ul |
2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
猪瘟抗体(CSF-Ab)elisa试剂盒的操作流程:
1.在各孔中加入标准品或样品各100μL,37℃孵育90分钟;
2.加入100μL 生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟;
3.洗涤3次;
4.加入100μL酶结合物工作液,37℃孵育30分钟;
5.洗涤5次;
6.加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右;
7.加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD值;
8.结果计算。
的结果判断与分析:
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的LAM标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的LAM含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3、检测值范围:0-480ng/ml
4、敏感度:0.1ng/ml
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