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羊elisa试剂盒组织样本的处理:
用预冷的PBS (0.01M,pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
羊elisa试剂盒固相载体原理:
一、良好的ELISA板应该是吸附机能好,空缺值低。
二、为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定,然后比较结果。可作ELISA中载体的材料良多,zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA试剂盒中用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠,表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。
三、与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA试剂盒所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%。其长处是表面积极大,反应在悬液中进行,其速率与液相反应近似。
在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别zui大,这种载体就是这一ELISA测定项目的zui合适的固相载体。小珠的另一特点是更易于使洗涤*,使用特殊的洗涤器,使小珠在洗涤过程中动弹淋洗,其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。ELISA试剂盒常用的检查方法为:以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体,保温后洗涤,加底物显色,终止酶反应后,分别测每孔溶液的吸光度。以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤利便,试剂盒一般均配以特殊仪器。
四、为便于作少量标本的检测,有制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与尺度ELISA板相同。聚苯乙烯ELISA板因为原料的不同和制作工艺的差别,各种产品的质量差异很大,因此,每一批号的ELISA板在使用前须事先检查其机能。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
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