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胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内降低血糖的激素,同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来糖尿病治疗。
胰岛素ELISA试剂盒因其准确性高、灵敏度高、特异性强等因素而广泛应用,灵敏度和检测样本有些关联的,如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高,则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低,则必须考虑灵敏度的问题。一般来说,胰岛素ELISA试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的,低于这个值因为与曲线是个“S"型结构有关,所以结果是有偏差的,是一种估算。再加上实验误差,所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时,应该看曲线上zui小的浓度值,而不是试剂盒上写的灵敏度。胰岛素ELISA试剂盒的操作要点
1、仔细阅读说明书,确定胰岛素ELISA试剂盒在有效期内。按说明书确定所有试剂齐全,以及所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
2、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
3、按胰岛素ELISA试剂盒说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂。
4、选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对。若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体,从同一家公司选择抗体。
5、一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的Elsia操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。