胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。胰岛素是机体内降低血糖的激素,同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来糖尿病治疗。
一般来说,胰岛素ELISA试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的,低于这个值因为与曲线是个“S"型结构有关,所以结果是有偏差的,是一种估算。再加上实验误差,所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时,应该看曲线上zui小的浓度值,而不是试剂盒上写的灵敏度。
虽然酶活性调节ELISA方法的灵敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大ELISA中,检测的灵敏度远比RIA高。根据质量作用定律。即免疫反应所形成的免疫复合物量与反应物浓度成正比。推测所检测的待测物分子数为1。已知1个摩尔浓度含6.02×1023个分子,那么理论推测酶活性放大ELISA方法的zui低检测限可达1.7×10-24mol/L。
虽然在实际应用中由于反应条件和试剂纯度以及仪器精度等因素的影响,往往达不到这个水平(大于104个分子),但表明ELISA在灵敏度方面的改进潜力是很大的。
胰岛素elisa试剂盒样品收集、处理及保存方法:
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。