ELISA实验的前期准备工作

ELISA试剂盒实验开端前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解;试剂或样品制作时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应猜测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的查看规划，核算时再乘以相应的稀释倍数。
反应时间的控制：参与底物后请守时查询反应孔的颜色改变（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提前参与中止液中止反应，避免反应过强然后影响酶标仪光密度读数。
弃去液体，甩干，不必洗刷。每孔加查看溶液A工作液100 （临用前制作），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。
弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
ELISA试剂盒加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100 ，留心不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，悄然晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为确保实验效果有效性，每次实验请运用新的标准品溶液。
每孔加查看溶液B工作液（临用前制作）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。
弃去孔内液体，甩干，洗板5次，办法同进程3。
每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可中止）。
每孔加中止溶液50 ，中止反应，此刻蓝色立转黄色。中止液的参与次第应尽量与底物液的参与次第相同。
ELISA试剂盒当即用酶标仪在450nm波长丈量各孔的光密度（值）。