ELISA实验标曲做不好是什么原因，孙老师在金益柏购买了elisa试剂盒，因为刚接触elisa实验，还是属于新手，研究大鼠干扰素相关指标的实验，做完大鼠γ干扰素ELISA实验后反应标准曲线的梯度都不好。刚加完显色剂的时候梯度还算明显，但是显色比较浅，随着时间延长（大概6、7分钟）以后梯度就不明显了。终止反应后测得的值梯度就没有了。


　　ELISA实验标曲做不好是什么原因：


　　1、刚加完显色剂时梯度明显：显色液可能是从高浓度向低浓度孔加的。


　　2、酶浓度太高，导致zui后显色结果都是高的


　　3、包被-酶标系统不匹配或者酶标的非特异反应太强，或者酶标仪读数范围不够，


　　4、样本中有能够催化底物的物质，没洗下来。


　　5、建议：包被、酶标重新做梯度，先用较低的浓度把梯度摸索好，然后再优化灵敏度，zui后调出所需的灵敏度、线性范围


　　6、有条件的话，可以把酶免的蛋白系统移植到板式化学发光上，加完底物三分钟读数。


　　7、蛋白系统灵敏度够的话，显色十分钟就差不多了。


　　8、酶是自己标的这种情况的，HRP比例不要太高。