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面议产品名称:人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 试剂盒
:135 64515386
产品规格:48T/96T
ELISA试剂盒说明书
Elisa试验在实验室中比较常见,那么elisa实验具体步骤怎么做,有没有比较详细的elisa试剂盒说明书呢?
Elisa试剂盒说明书如下:
ELISA试剂盒说明书1:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10靏/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA试剂盒说明书二:用于检测未知抗体的间接法:
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10靏/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。 2.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3.于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
4.于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟 5.于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6.可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域
人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒间接法简单操作步骤:
(1)、将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原;
(2)、加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗-体复合物;
(3)、加酶标抗抗体;
(4)、加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗体的量成正比。
人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 试剂盒操作技术相关的注意事项:
⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。
(3)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。
(4)用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。
(5)合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。
(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
(7)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。
(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
(9)应保证C清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。
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人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 试剂盒 所生产销售的各种ELISA试剂盒均采用的是定量夹心酶联免疫技术。抗体具体为FGF6已经被预先涂到微孔板。标准和样品吸入井和任何FGF6目前被绑定的固定化抗体。*共轭的抗体特异性FGF6除去任何未结合的物质后,加入到孔中。抗*蛋白共轭的辣根过氧化物酶(HRP)的洗涤后,加入到孔中。经过洗涤,以除去任何未结合的抗*蛋白的酶试剂,底物溶液加入到孔中,显色成比例的量的初始步骤中的约束的FGF6。彩色显影被停止并测量的颜色的强度。
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人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 试剂盒如何鉴别不正规伪劣ELISA试剂盒
随着生命科学技术的高速发展,生物公司如雨后春笋一般纷纷涌现,各类生物试剂产品大大方便了科研工作者的工作。无疑,健康有序的生物试剂产业环境和秩序对于整个行业的健康发展有着举足轻重的作用。然而,近来许多客户向我们反映一些唯利是图的公司和小作坊,用不正规伪劣的ELISA试剂盒坑害广大的科研工作者,他们往往唯利是图,无视科学研究的严谨性和严肃性,让广大的科研工作者被动造假,严重扰乱了科研工作,严重扰乱了市场秩序,所以我们有义务,有责任揭露这些作伪造假者制作不正规伪劣ELISA试剂盒的手法,同时提供如何鉴别这些不正规伪劣ELISA试剂盒的方法,供广大的科研工作者和用户参考,让那些挂羊头卖狗肉,冒牌进口试剂,以及全无诚信,作假造伪者,如过街之鼠,人人喊打。
造假一:在国外注册公司,国内生产,隐瞒生产产地,明明是国产试剂却宣称国外进口虚报高价,欺骗广大用户。
鉴别方法:将“厂家名”、“ELISA”和“假货”关键词在google上搜索,各类论坛的用户会将该ELISA试剂盒的质量和效果,是否伪劣一一有所讨论。 造假二:仿冒进口ELISA试剂盒,使得进口分装ELISA质量参差不齐,鱼龙混杂,很多都是经小作坊粗劣加工而成,这样的试剂盒偶尔可以侥幸做出结果,如果做不出来,所购买的公司又没有完善的售后服务,往往对客户的问题推三阻四,推脱责任,zui后还是消费者吃亏。
鉴别方法:直接打给生产厂商,询问他们试剂盒抗原和抗体的来源,索要试剂盒说明书,然后利用网络确认这些信息,正规的ELISA生产商,这些信息都是非常齐全,如果信息不全,则该ELISA的制造水平和质量都会很差。 造假三:某些不正规厂家为了夸大其生产ELISA涵盖的指标的范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGFβ这样的指标代替大多数试剂盒的其他指标作为检测抗体,同样可以获得良好的标准曲线。因为TGFβ在大多数哺乳类动物中(人、大鼠、小鼠、猪、牛„„)都有广泛表达,种属间抗原的氨基酸序列同源性达*,TGFβ随着其他因子的影响,其表达水平也会发生相应的变化,一般客户很难察觉,因此这样的恶性造假行为使得消费者被动造假,后果极其严重,因此善意提醒客户警惕此类作假试剂