细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
公司产品仅用于科研以下是细胞的订购信息：

英文简称：SKM-1细胞    

产品名称：骨髓增生异常综合征细胞

规格：T25

形态特性：

生长特性：贴壁生长

特征特性：

培养条件：RPMI1640+10% or 20%FBS

传代方法： 1:2传代；

货号：CS-X63943

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

注意事项：
（1）冻存前细胞状态，细胞在对数生，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）消化和吹打，切忌消化过度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻”，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
实验报告
一、产分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
球孢白僵菌拉丁属名: Flavobacterium sp.

硬水黄杆菌拉丁属名: Hymenobacter sp.

薄层菌属拉丁属名: Parvovirus Porcine parvovirus

猪细小病*注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

链格孢拉丁属名: Phomopsis sp.

拟茎点属拉丁属名: Clostridium sporogenes

生孢梭菌拉丁属名: Pseudomonas oryzihabitans

栖麦假单胞菌拉丁属名: Aspergillus  usamii

宇佐美曲霉拉丁属名: Bacillus  subtilis

枯草芽胞杆菌拉丁属名: Actinomadura alba

白色马杜拉放线菌拉丁属名: Marinobacter pelagius

海海杆状菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

杏鲍菇拉丁属名: Penicillium  citrinum

橘青霉拉丁属名: Penicillium citrinum

桔青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用

黄白侧耳（姬菇）拉丁属名: Memnoniella echinata
SKM-1细胞葡聚糖D20/右旋糖苷英文名称： Phospholipase A2 ActivatingPeptide蛋白磷酸酶-1B抗体包装1g

普拉克索碱英文名称： PhysalaeminCyclin A1相互作用蛋白抗体包装5g

普拉洛芬英文名称： PKI-tide野生型P53诱导基因1单克隆抗体包装1g

英文名称： Plaet Factor 4 (58-70)(human)多囊肾蛋白1抗体包装1g

普瑞巴林英文名称： Pneumadin (human)多囊肾蛋白2抗体包装250mg

英文名称： Pneumadin (rat)凋亡相关蛋白4抗体包装2ml

齐留通英文名称： Prion Peptide (106-126),Human磷脂酰肌激酶催化亚单位D抗体包装25g

羟苯磺酸钙英文名称： Proadrenomedullin (1-20)(human)血小板源性生长因子受体β样蛋白抗体包装5g

氢化奎宁定;双氢奎尼丁英文名称： Proadrenomedullin (45-92)(human)磷酸化磷酯酶Cβ3抗体包装25ml

氢槟榔碱(进口)英文名称： Protein Kinase C (19-31)磷酸化蛋白激酶样内质网激酶抗体包装5ml

氢槟榔碱; 槟榔碱氢盐(国产)英文名称： Protein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein6磷酸果糖激酶2抗体包装100g

氢达非那新英文名称： Protein Kinase C (530-558)磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体包装1g

氢后马托品英文名称： pTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)磷酸化磷脂酰肌激酶抗体包装25g

氢加兰他敏英文名称： pTH (13-34) (human)磷酸化蛋白激酶C α/β2抗体包装5g

氢英文名称： pTH (3-34) (bovine)蛋白激酶C α抗体包装100g