细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
公司产品仅用于科研以下是细胞的订购信息：

英文简称：SK-MEL-5细胞    

产品名称：恶性黑色素瘤细胞

规格：T25

形态特性：星形的

生长特性：贴壁生长

特征特性：

培养条件：EMEM +10%FBS

传代方法： 1:CQ-1:6传代，2-3天换液1次。

货号：CS-X63978

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

注意事项：
（1）冻存前细胞状态，细胞在对数生，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；
（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。
（3）消化和吹打，切忌消化过度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。
（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。
（5）关于“慢冻”，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
实验报告
一、产分离与培养：
   1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
   2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
   3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
   4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
   5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
   1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
   2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
   4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
   5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
   6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)检测试剂盒英文名称：IL-1sRⅡ ELISA Kit炭疽杆菌抗体包装1g

白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)检测试剂盒英文名称：IL-1sRⅠ ELISA Kit肾上腺皮质发育异常蛋白抗体包装1g

白介素1β前体(pro-IL1B)检测试剂盒英文名称：pro-IL1B ELISA Kit血管紧张素Ⅱ1A型受体抗体包装250mg

白介素1β(IL－1β)检测试剂盒英文名称：IL－1β ELISA KitABI1/SSH3BP1蛋白抗体包装25g

白介素1β(IL-1β)检测试剂盒英文名称：IL-1β ELISA Kit乙酰化组蛋白H1b抗体包装5g

白介素1α(IL－1α)检测试剂盒英文名称：IL－1α ELISA Kit磷酸化雄受体抗体包装1g

白介素1α(IL-1α)检测试剂盒英文名称：IL-1α ELISA Kit多功能DNA修复酶抗体包装5g

白介素18结合蛋白(IL-18BP)检测试剂盒英文名称：IL-18BP ELISA KitAP2关联激酶1抗体包装1g

白介素18(IL－18)检测试剂盒英文名称：IL－18 ELISA Kit通道蛋白1抗体包装200mg

白介素18(IL-18)检测试剂盒英文名称：IL-18 ELISA KitAATK凋亡关联激酶抗体包装100mg

白介素17A(IL－17A)检测试剂盒英文名称：IL－17A ELISA KitATP结合蛋白家族5抗体包装25g

白介素17(IL－17)检测试剂盒英文名称：IL－17 ELISA KitN-基嘌呤DNA糖基化酶包装5g

白介素16(IL-16)检测试剂盒英文名称：IL-16 ELISA KitAU5 tag标签抗体包装1g

白介素15(IL-15)检测试剂盒英文名称：IL-15 ELISA Kit钙离子ATP酶通道蛋白抗体包装5g

白介素13(IL－13)检测试剂盒英文名称：IL－13 ELISA Kit果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗体包装1g
SK-MEL-5细胞Patched/PTCH抗体包装100g

前列腺素E合成酶抗体包装25g

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗体包装500g

/蛋白激酶Plk1抗体包装1g

磷酸化丝/蛋白激酶Plk1抗体包装5g

亲环蛋白（亲环素）PPIG抗体包装100g

磷酸化亲环蛋白（亲环素）PPIG抗体包装25g

磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗体包装25g

磷酸化腺衍生血管内皮生长因子抗体包装5g

富含的激酶2抗体包装1g

磷酸化富含的激酶2抗体包装1g

磷酸化富含的激酶2抗体包装25g

磷酸化/激酶p90RSK蛋白抗体包装5g

磷酸化/激酶p90RSK蛋白抗体包装1ml

磷酸化/激酶p90RSK蛋白抗体包装1g