公司是*的ATCC细胞供应商，提供人浸润性导管癌旁皮肤细胞；CCD-1095Sk 的报价，咨询，称技术服务，咨询选购。
细胞名称  人浸润性导管癌旁皮肤细胞；CCD-1095Sk  
形态特性   成纤维细胞  
生长特性  贴壁生长  
特征特性   此株细胞从左乳房的活体组织切片的正常皮肤建立。 病人患有浸润性导管癌并患有湿疹样癌本病。 这一代次的细胞已经过两次数目倍增，约可再进行10次数目倍增。    
培养条件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  优质胎牛血清，10%  
传代方法   消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。  
传代情况  P(1+5)  
冻存条件   *培养基+8%DMSO  
支原体检测  阴性　  
STR    
同工酶    
染色体    
使用权限  A类 培养需要满足以下条件
1、无菌、无毒的环境：首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。

2、营养物质：细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生长子、无机盐、微量元素等。通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。

3、温度和pH：细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。

4、气体环境：培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。

操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。  
5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得。  
细胞用途：仅供科研使用。  
小鼠胚胎成骨细胞 

细
人胚实验方法和步骤
(一) 前处理 用台称称量青蛙或蟾蜍的体重，然后按10微克／克动物体重的剂量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小时后，将动物处死，用剪刀剪开皮肤和肌肉，取出大腿骨和胫骨，剔净股骨上的肌肉，然后用一小块纱布来回搓干净。剪开两端股骨，用注射器（内装5ml 1％ 柠檬酸钠溶液）缓慢冲洗骨髓细胞到离心管中，经平衡后离心8分钟，速度为1000转／分钟。
(三) 低渗 吸去上清液，留沉淀物0.2ml，加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度，用吸管冲匀沉淀物，在恒温水浴(28℃)处理20分钟或更长一点时间。
(四) 固定 低渗后，以每分钟1000转速度离心10分钟。用吸管小心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，冲散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 冲匀后静止固定20分钟。重复固定1～2次，离心的速度与时间以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加4滴新配的固定液，冲匀沉淀物。从冰箱取出预先冷冻的载片，每片滴3滴细胞悬液，立即用嘴向载片上吹气，使细胞均匀分散，在酒精灯火焰上来回烤一下，以助染色体更好分散和展开。 (六) 染色 用10：1 Giemsa染液染色20分钟(Giemsa原液用PH＝6.8磷酸缓冲液稀释)，然后用水冲洗，片干后镜检。 (七) 镜检 在中倍镜下找染色体分散好的中期分裂相，转至高倍镜详细观察两栖类染色体的数目，属于大、中、小染色体各有多少条。
注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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