公司是*的ATCC细胞供应商，提供人正常眼睑上皮细胞；HNEEC/HL-014
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细胞名称  人正常眼睑上皮细胞；HNEEC/HL-014  
形态特性   上皮样  
生长特性  贴壁生长  
特征特性   该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。   
培养条件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS　  
传代方法   1:3传代，3-4天传1次  
传代情况  C5  
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS　  
支原体检测  阴性　  
STR    
同工酶    
染色体    

使用权限  未定培养需要满足以下条件
1、无菌、无毒的环境：首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。

2、营养物质：细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。

3、温度和pH：细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。

4、气体环境：培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。

操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
1)细胞来源于实验动物正常肝组织。  
2)细胞鉴定：血管假性血友病子（WF）免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式：上皮样，多角形细胞，贴壁培养。  
食管上皮细胞  
细胞详述  
食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。在发育过程中，食管的上皮细胞增殖，由单层变为复层，食管使管腔变狭窄，甚至一度闭锁，以后管腔又重新出现。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，黏膜层，包括上皮、固有层和黏膜肌层。上皮为较厚的未角化的复层扁平上皮，耐摩擦，有保护作用。在食管与胃贲门交界处，复层扁平上皮突然变成单层柱状上皮。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常食管组织。  
2)细胞鉴定：广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。  
食管平滑肌细胞  
细胞详述  
食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，肌层，上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成。其肌纤维的排列为内环形和外纵形两层。食管还有括约肌，位于人环状软骨水平的,称为食管上括约肌;位于食管下端,一部分在膈上，穿过膈孔，另一部分在膈下的高压带，称为食管下括约肌。食管平滑肌瘤是起源于食管平滑肌的良性肿瘤，发生部位多见于食管中段，其次为下段，颈段罕见。临床上大多数病变发生在壁间，其余可在腔内，外膜下及少数呈弥漫型，使食管肌层呈广泛瘤样增生。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常食管组织。  
2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。  
食管成纤维细胞  
细胞详述  
食管可分为颈段、胸段和腹段。脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之间的纵膈内，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，粘膜层与黏膜下层中的结缔组织是由成纤维细胞构成。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常食管组织。  
2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（imentin）免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。  
胃黏膜上皮细胞  
细胞详述  
胃黏膜柔软，活体呈橘红色。胃空虚时形成许多皱襞，充盈时变平坦。幽门处的黏膜形成环形皱襞，突向腔内称幽门瓣。胃黏膜可分为三层，即上皮层、固有层和黏膜肌层。其中，上皮层为单层柱状上皮，排列整齐，能分泌黏液覆盖于胃黏膜的表面，防止胃酸和对胃黏膜的损害。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常胃组织。  
2)细胞鉴定：广谱角蛋白（PCK）或细胞角蛋白-19（CK-19）免疫荧光染色为阳性。鉴定细胞纯度高于90%。  
3)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。  
4)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。  
胃平滑肌细胞  
细胞详述  
胃壁一般由 3层组织构成，内层是粘膜层，外层是浆膜层,中间是由平滑肌组成的肌层。胃平滑肌瘤是zui常见的胃良性间叶组织肿瘤，起源于中胚层组织。此，胃平滑肌细胞的体外培养为研究胃平滑肌瘤提供了前提和基础。  
细胞特性  
1)组织来源于实验动物的正常胃组织。  
2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。  
3)鉴定细胞纯度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原体、细菌、酵母和真菌。