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面议细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
公司产品仅用于科研以下是细胞的订购信息:
英文简称:Duckembryo细胞
产品名称:鸭子胚胎成纤维细胞;Duckembryo
规格:T25
形态特性:成纤维母细胞样
生长特性:贴壁生长
特征特性:
培养条件:FM培养基
传代方法:1:2传代
货号:CS-X63214
注意事项:
(1)冻存前细胞状态,细胞在对数生,细胞密度适合,刚刚发生细胞融合,过密或连成片的细胞状态不好,而且消化时不容易分散;
(2)冻存的密度不宜过低,10的6次方-7次方的数量级比较好,我冻存的细胞一般T25培养瓶(5*107),一瓶冻一管(1.5ml冻存管),10cm培养皿(大概10的8次方个细胞)分成两管。
(3)消化和吹打,切忌消化过度,吹打不可太用力,不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦,不是加入冻存液再吹打。
(4)离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格,我从10%-90%都用过,问题不大,个人认为10%-20%可以了,能节约处就节约点嘛!另外,冻存液可以在处理细胞前配置,放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬,移入冻存管。
(5)关于“慢冻”,传统的方法,LLC细胞冻存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更长,-80度过夜,最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室,使用程序降温盒,内装异丙醇,在-80度并内可以逐渐降温,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
实验报告
一、产分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
N-苯邻苯二美澳型核果褐腐病菌用途: 能于30℃、48小时内降解82%以上的浓度为60μL/100m的十八烷,对十八烷为碳源(无机盐培养)
二苯腙短波单胞菌拉丁属名: Xylaria curta
二苯腙白鳞炭角菌拉丁属名: Listeria seeligeri
二苯腙斯氏李斯特氏菌拉丁属名: Streptomyces coerulescens
4-苯-3-硫代氨脲变天蓝链霉菌拉丁属名: Sphingobacterium faecium
4-苯-3-硫代氨脲粪鞘氨杆菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
7-氨-4-三氟根瘤菌拉丁属名: Brevibacillus aydinogluensis
7-氨-4-三氟短芽孢杆菌属拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
3,5-二氨苯酿酒酵母拉丁属名: Bacillus brevis
3,5-二氨苯短芽孢杆菌拉丁属名: Candida boleticola
3,5-二氨苯菌生假丝酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
5-溴噻吩-2-磺酰酿酒酵母拉丁属名: Aspergillus carbonarius
5-溴噻吩-2-磺酰炭黑曲霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
5-噻吩-2-磺酰福氏志贺氏菌拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
5-噻吩-2-磺酰酿酒酵母注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
2,5-二噻吩-3-磺酰斑玉蕈拉丁属名: Vishniacozyma victoriae
Duckembryo细胞神经元突触膜胞外分泌调节蛋白3抗体L-(-)-上腺素 EPINEPHRINE, R-(-)-(RG)Human, Mouse, Rat
神经元突触膜胞外分泌调节蛋白4抗体戊五/核糖 ADONITOL(RG)Human, Mouse, Rat
认知缺陷突触相关蛋白SynGAP抗体戊五/核糖 ADONITOL(RG)Human, Mouse, Rat
Kartagener综合征相关蛋白RSHL3抗体ADHYPERFORIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
反义导向分子RGMA抗体ADHYPERFORIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat
反义导向分子RGMB抗体S-腺苷-L-蛋氨盐 ADENOSYL-L-METHIONINE IODIDE, S-(RG)Human, Mouse
反义导向分子RGMC抗体S-腺苷-L-蛋氨盐 ADENOSYL-L-METHIONINE IODIDE, S-(RG)Human, Mouse
轴突导向受体蛋白3抗体S-(5'-腺苷)-L-化蛋氨 ADENOSYL-L-METHIONINE CHLORIDE, S-(RG)Human, Mouse, Rat
G蛋白相关RABX5抗体1-(4-氨丁)胍硫盐 AGMATINE SULFATE SALT(P)Human, Mouse, Rat