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人结直肠癌氟*耐药株细胞
Human Colorectal Cancer Fluorouracil Resistant Strains
货号:HCT-8/FU
价格:¥1500.0
规格: 1*10 6
细胞介绍
这是一株耐药细胞株。
人结直肠癌氟*耐药株细胞细胞特性
1)来源:人结肠癌
2)形态:上皮细胞样
3)含量:>1x106 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
人结直肠癌氟*耐药株细胞运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
注意:客户收到细胞后按照下面的要求操作:培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 70-80%的汇合度时,去掉培养液,加入含 8000ng/ml FU 药物的培养液,放入培养箱,这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来,但是不要紧,通过换液可以去掉,下面的细胞待长满就可以消化传瓶了,这时可以一直用含
药培养液来消化培养细胞,一两代之后可以将药物浓度提高到 15000ng/ml,含药培养液用于细胞培养都没问题的,冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%,添加1%双抗,15000ng/ml 氟*。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量*,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
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