看！！！动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺测定的前处理方法
时间：2021-05-13 阅读：600
环丙氨嗪，又名“灭蝇胺”，养殖场通常称为“蝇蛆净”，属于1, 3, 5-三嗪类昆虫生长调节剂。环丙氨嗪也是一种高效的昆虫生长抑制剂， 常作为饲料添加剂广泛应用于畜牧业动物饲料中，以原药以及代谢产物的形式随粪便排出体外，并沉积在粪便中以杀灭粪便中的蝇蛆，从而控制畜禽舍以及周围环境中的有害昆虫，达到净化环境的目的，且能提高动物生长性能。在动物养殖生产过程中，许多养殖户为了减少养殖场的蚊蝇，把环丙氨嗪长期应用于动物饲料中，导致畜禽肌肉组织中药物残留超标，严重威胁着消费者身体健康。为此我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最 大残留*》中明确规定了环丙氨嗪在动物靶组织中的残留*，并且规定泌乳期禁用。
本文阐述了如何将环丙氨嗪和三聚氰胺从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB 29704-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。
检测项目：环丙氨嗪、三聚氰胺
应用范围：鸡的肌肉、肾脏和蛋
超高效液相色谱-串联质谱法
方法原理：试料中残留的环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺，用3 %三氯/ (乙）乙1酸溶液提取，MCX柱净化，超高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。
前处理仪器：
分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；涡旋混合器；离心机；氮吹仪；离心管（50 mL），微孔滤头（0.2 μm）；固相萃取装置。
检测仪器：UHPLC-MS/MS+ESI源
1. 鸡蛋
取新鲜或冷冻空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。
取均质后的供试样品，作为供试试料；
取均质后的空白样品，作为空白试料；
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
2. 鸡的肌肉和肾脏组织
取新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎，并使均质。
取均质后的供试样品，作为供试试料；
取均质后的空白样品，作为空白试料；
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
所有试料在零下20 ℃ 以下保存。
1.提取
称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，加3 %三氯/ (乙） 乙1酸溶液20 mL，涡旋混合30 s，超声10 min，静置10 min，10000 r/min离心10 min，取上层液，备用。
2.净化
MCX柱（60 mg，3 mL）依次用甲醇3 mL和水3 mL活化，取备用液10 mL过柱，加2 %甲酸水溶液3 mL、甲醇3 mL淋洗，抽干，加5 %氨化甲醇溶液3 mL洗脱，抽干，收集洗脱液，于50 ℃ 氮气吹干，用50 %乙腈水溶液1.0 mL溶解残余物，滤膜过滤，供液质测定。
国标解读及注意事项
1.标准物质用50 %乙腈水溶液配成1 mg/mL标准储备液，在2 ℃～8 ℃避光保存，可使用3个月。
2.本方法使用三氯/ (乙）乙1酸溶液提取目标化合物，阳离子交换柱进行富集净化，稀释倍数=2，相当于1 g试料进行上机检测。
3.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。
4.氨水甲醇溶液现用现配，避免氨水挥发，影响洗脱效果；洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。
5.由于环丙氨嗪和三聚氰胺极性比较强，建议选用长的（150 mm）亲水型色谱柱，保证色谱峰的保留效果。
6.本方法使用基质曲线进行定量，还可以使用环丙氨嗪和三聚氰胺相对应的同位素内标配制标准曲线。
GB 29704-2013 食品安全国家标准 动物性食品中环丙氨嗪及代谢物三聚氰胺多残留的测定 超高效液相色谱-串联质谱法
