值得收藏！动物源性食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理方法
时间：2021-05-28 阅读：489
值得收藏！动物源性食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理方法
甲苄喹啉和癸氧喹酯同属于喹啉类抗球虫药物，用于预防及治疗球虫病。这类抗球虫药具有毒性低、耐受性好、代谢快的优点，应用非常广泛。甲苄喹啉的抗球虫效力较强，是癸氧喹酯的两倍。癸氧喹酯是全球一被日本、欧盟、美国和中国政府批准使用的化学型抗球虫药，与目前中国允许使用的兽药饲料添加剂无任何配伍禁忌。尽管这类抗球虫药物的毒性较低，但抗球虫药物的使用易导致球虫出现抗药性，并且畜牧生产中使用抗球虫药物有加大剂量的倾向。为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留*》中明确规定了癸氧喹酯在鸡靶组织中的残留*。
本文阐述了如何将甲苄喹啉和癸氧喹酯从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据行标SN/T 2444-2010，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。
检测项目：甲苄喹啉、癸氧喹酯
应用范围：鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶
液相色谱-质谱/质谱法
方法原理：采用乙腈提取试样中残留的甲苄喹啉和癸氧喹酯，提取液经固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法定量。
前处理仪器：
固相萃取装置；氮吹浓缩仪；均质器；旋涡混匀器；离心机（5000 r/min以上）；分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；移液器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；聚丙烯离心管（50 mL和15 mL，带螺旋盖）；容量瓶（100 mL和1000 mL）；往复式振荡器。
检测仪器：LC-MS/MS+ESI源
从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于零下18 ℃ 以下冷冻存放。
从所取全部样品中取出有代表性样品约500 g，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于4 ℃ 冷藏存放。
制样要求：在制样的操作过程中，应防止样品污染。
称取样品5 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入15 mL乙腈，旋涡混匀1 min，在往复式振荡器上振荡提取5 min，3000 r/min离心5 min，将上清液转移至另一50 mL离心管中。在残渣中加入10 mL乙腈，重复提取一次，5000 r/min离心5 min，合并乙腈层。在乙腈提取液中加入过量氯化钠，旋涡混匀1 min，5000 r/min离心3 min。取上层乙腈层5 mL于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至3 mL，加水定容至10 mL，待净化。
将待净化液转入HLB固相萃取柱（60 mg，3 mL使用前依次用5 mL甲醇和5 mL水活化），以约3 mL/min的流速使样液全部通过固相萃取柱，弃去流出液。再分别用3 mL 30 %乙腈水溶液，3 mL水淋洗，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱15 min。用3 mL乙腈洗脱被测物于15 mL离心管中，45 ℃水浴下吹氮浓缩至近干，用样品定容溶液（乙腈+水1+1加0.1 %甲酸）溶解并定容至1.0 mL，旋涡混匀后过0.2 μm滤膜，用液相色谱-质谱/质谱仪测定。
国标解读及注意事项
1.甲苄喹啉标准物质用N,N-二甲基甲酰胺配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存；癸氧喹酯标准物质用三氯（甲）甲烷配成100 mg/L的标准储备液，在零下18 ℃以下避光保存。
2.本方法使用乙腈分两次提取目标化合物，加盐净化后，再使用HLB柱进行富集净化，相当于1 g试料进行上机检测。
3.使用乙腈作为提取溶剂时，需要注意乙腈沉淀蛋白的效果很好，但是容易使肌肉样品“抱团”不分散，影响目标物的提取率。所以在加入乙腈后应立即进行涡旋处理，使肉样分散。
4.固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证吸附解离的效果。
5. HLB柱淋洗后一定要充分抽干小柱中的水，防止水进入洗脱液中，导致后续浓缩过程中洗脱液不能被吹干。
6.本方法使用基质加标流程曲线进行定量，还可以使用癸氧喹酯相对应的同位素内标配制标准曲线。
SN/T 2444-2010进出口动物源食品中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
图1鸡肉、鸡肝、鸡肾、鸡蛋、牛肝和牛奶中甲苄喹啉和癸氧喹酯残留量测定的前处理流程图