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上海市所在地
产品特点:
◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝;
◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 猫免疫缺陷病毒LAMP试剂盒 |
英文名称 | Lamp kit for cat immunodeficiency virus |
货号 | BJ-P99204 |
服务流程:
1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针(染料法只需设计引物)
2、抽提DNA、RNA,并对RNA进行逆转录
3、实时荧光定量PCR
4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)
5、返还样品(引物、RNA和cDNA)
使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
T-101B(含100mL 酶解缓冲液)10mL低熔点琼脂糖;具有低凝胶温度的琼脂糖质量规格:BR;具有低凝胶温度Agarose, low gelling temperature
IL6ST Others Mouse 小鼠 IL6ST / CD130 CHO细胞裂解液 (阳性对照) 无水1酸二氢钾质量规格:>99%,分子生物学级Potassium phosphate, monobasic, anhydrous
脑膜细胞生长添加物MenCGS十一酸甲酯(Standard for GCS,≥99.0%(GC))质量规格:Standard for GCS,≥99.0%(GC)Methyl undecanoate
大额牛皮肤成纤维样细胞;BOS-2 7721肝癌细胞,7721细胞 HuT78(T细胞白血病细胞)正壬烷(standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格:standard for GC,≥99.5%(GC)Nonane
EB病毒转化的B细胞;KMYB正壬醇(Standard for GC,≥99.5%(GC))质量规格:Standard for GC,≥99.5%(GC)1-Nonanol
CM-R011大鼠肺大动脉内皮细胞*培养基100mL川续断皂苷乙(标准品)Dipsacoside B质量规格:HPLC≥98%,标准品
MiaPaCa-2, 胰腺癌细胞野鸢尾黄素(标准品)Irisflorentin质量规格:HPLC≥98%,标准品
EB病毒转化的B细胞;KMY1036 神经小胶质细胞*培养基 100mL刺芒柄花苷(标准品)Ononin质量规格:HPLC≥98%,标准品
角膜上皮细胞cDNAHCEpiC cDNA刺五加苷E(标准品)Eleutheroside E质量规格:HPLC≥98%,标准品
THOP1 Others Mouse 小鼠 THOP1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 刺五加皂苷B(标准品)Ciwujianoside B质量规格:HPLC≥98%,标准品
猫免疫缺陷病毒LAMP试剂盒PDGFRB Others Cynomolgus 食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 细胞裂解液 (阳性对照) GLUTARALDEHYDE,50%SOLUTION 50%溶液试剂级透明淡黄色液体COLDsigma
小鼠胚胎成纤维细胞;C3H 10T1/2 2A63-硼醋(含有数量不等的腊酐) 3-Pyridylboronic ccid 169-2-7
95-C细胞,低转移肺癌细胞 大鼠肾小管上皮细胞,NRK细胞 CL-0154MDCK(犬肾细胞)5×106cells/瓶×2乳酸菌液体培养基100克
TSCCa(舌鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2MEHQ对羟基本5克特,99%
HCF-c 类的心脏成纤维细胞(HCF) 500,000cells 神经元细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)89-01-0吡嗪-2,3-二羧酸;对二氮杂本-2,3-二羧酸Pyr-2,3-dicarboxylic acid