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NHS-Activated Magnetic Beads 是均匀的，表面覆盖有高密度NHS（N-羟基琥珀 酰亚胺） 官能团的磁珠。磁珠通过形成稳定的酰胺键方式，快速、高效的共价结合任何含有伯胺的配 体(图 1）。本款磁珠可以在偶联条件下快速完成反应（室温 pH 6.5-9 下 15-30 分 钟，4℃ 下 4 小时），且不需要危险化学品。 NHS-activated Magnetic Beads 适于结合大分子蛋白。 Long-arm NHS-activated Magnetic Beads 被推荐用于结合小肽分子， 因为其长臂（21-原子） 的亲水连接基团可以减少位阻现象。 NHS-activated Magnetic Beads 可以地作为亲和树脂进行亲和纯化，将分子、 细胞和 部分细胞提取物进行提炼纯化。在与配体结合后，将磁珠添加到含有目标分子的样品中，然 后混合、孵育、洗涤和洗脱目标分子（图2）。

产品特点及优势：

·预活化即用型磁珠

·便于使用

·在pH7.4，4℃-25℃条件下可以快速偶联

·稳定的共价键，低水平的配体泄漏

·可重复使用的免疫亲和基质

·极低的非特异性结合率

·用途：用于纯化抗体，蛋白质/肽，DNA / RNA;细胞筛选、免疫沉淀

操作步骤

提示：

强烈建议在实验过程中进行滴定优化，以确定每个实验中应用的磁珠数量。该协议可以相应地放大和缩小。避免使用含有 tris 或其他含有伯胺类试剂的缓冲液，因为它们与预期的偶联反应竞争。

1.将适量的珠子转移到离心管中。将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀时， 去除上清液。 

2.取下试管，加入 5 倍磁珠溶液体积的 PBS 缓冲液，通过震荡重新悬浮磁珠，涡旋 30 秒。将试管至于室温环境 1-3 分钟，再将管放在磁力分离器上 1-3 分钟。当磁珠沉淀 时，去除上清液。 

3.重复步骤 2 两次。 

4.向含有目标蛋白质的粗样品中添加洗涤过的磁珠，并在室温或所需温度下温浴 1-2 小时 （温度越低，培养时间越长）。提示：强烈建议进行滴定实验以优化培养时间。因为孵化 的时间太长可能会导致很高的背景。 

5.用 5 倍磁珠体积的 PBS 缓冲液或 1M NaCl 清洗磁珠，直到 280nm 处洗脱液的吸 光度接近背景水平（OD 280<0.05）。提示：添加更高浓度的盐、非离子洗涤剂和还原剂也 可能会降低非特异性背景。例如，向洗涤缓冲液中添加 NaCl（浓度为 1-1.5 M）、0.1-0.5% 的非离子洗涤剂，如 TritonX-100 或 Tween-20，以及还原剂，如 DTT 或 TCEP（我们通 常使用 3mM）。 6.通过适当的方法，如低 pH（2-4）、高 pH（10-12）、高盐、高温、亲和洗脱或 SDS-PAGE 上样缓冲液中煮沸，洗脱目标蛋白。

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